目的:急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）是冠狀動脈粥樣硬化性心臟�。–oronary heart disease,CHD）中最危急和最嚴重的類型,臨床治療指南推薦盡快開通閉塞血管使冠狀動脈恢復(fù)血流為最佳治療手段。然而,當血管開通使心肌得到再灌注時,有些患者卻出現(xiàn)心律失常、血管無復(fù)流、心肌壞死范圍擴大等心肌缺血再灌注損傷（Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）的現(xiàn)象,隨著再灌注手段的發(fā)展與應(yīng)用,再灌注損傷的現(xiàn)象越來越得到重視。再灌注損傷的發(fā)生機制十分復(fù)雜,再灌注過程中一些因素激活細胞凋亡、壞死等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,最終導(dǎo)致心肌的損傷、壞死。隨著對基因研究的深入以及生物信息學(xué)的發(fā)展,長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNAs,LncRNAs）被發(fā)現(xiàn)可以直接或間接調(diào)控編碼蛋白基因或蛋白,成為近幾年心肌缺血再灌注損傷機制及防治的研究熱點。尋找參與調(diào)控的LncRNA并深入研究調(diào)控機制成為防治心肌缺血再灌注損傷的一個新的切入點。LncRNA GAS5（growth arrest specifi...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:LncRNA GAS5 在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的表達及作用研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗細胞
            2.1.2 實驗動物
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要試劑
            2.1.5 引物序列
            2.1.6 siRNA序列
        2.2 方法
            2.2.1 相關(guān)溶液的配制
            2.2.2 動物離體心肌缺血再灌注損傷模型的建立
            2.2.3 實驗動物分組
            2.2.4 H9c2心肌細胞培養(yǎng)
            2.2.5 心肌細胞缺氧復(fù)氧模型的建立
            2.2.6 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.7 細胞實驗分組
            2.2.8 CCK-8細胞活性檢測
            2.2.9 LDH活性測定
            2.2.10 CK-MB活性測定
            2.2.11 GSH活性測定
            2.2.12 Hoechst染色
            2.2.13 流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡情況
            2.2.14 Western blot分析
            2.2.15 總RNA提取
            2.2.16 提純RNA及定量
            2.2.17 逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.18 Real-time PCR
            2.2.19 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 GAS5 在大鼠IR心肌組織和HR心肌細胞中上調(diào)表達
        3.2 GAS5對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9C2心肌細胞損傷的影響
            3.2.1 沉默GAS5表達對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9c2心肌細胞損傷的影響
            3.2.2 沉默GAS5表達對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9C2心肌細胞凋亡的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:LncRNA GAS5在H9c2 缺氧復(fù)氧損傷中通過競爭性結(jié)合miR-532 調(diào)控PI3K/AKT通路
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 實驗細胞
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 引物序列
            2.1.5 miRNA mimic/inhibitor序列
        2.2 方法
            2.2.1 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2 細胞實驗分組
            2.2.3 CCK-8細胞活力檢測
            2.2.4 LDH活性測定
            2.2.5 GSH活性測定
            2.2.6 CK-MB活性測定
            2.2.7 流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡情況
            2.2.8 Realtime PCR
            2.2.9 Western blot分析
            2.2.10 生物信息分析
            2.2.11 熒光素酶報告基因
            2.2.12 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 預(yù)測GAS5 的下游靶基因及ceRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        3.2 GAS5、miR-532-5p、PTEN在 H9c2 缺氧復(fù)氧損傷的表達及相互作用關(guān)系
        3.3 熒光素酶實驗驗證GAS5與miR-532-5p、miR-532-5p與PTEN結(jié)合位點
        3.4 miR-532-5p對心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷的影響
        3.5 GAS5、miR-532-5p可調(diào)控PTEN的蛋白表達
        3.6 GAS5 作為ceRNA結(jié)合miR-532-5p在 HR損傷中調(diào)控PI3K/AKT通路
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述 長鏈非編碼RNA在缺血性心臟病中調(diào)控的研究進展
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4049058