為探討B(tài)細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2和腺病毒E1B19 000相互作用蛋白3(B cell lymphoma/lewkmia-2 and adenovirus E1B19 000 interacting protein 3,BNIP3)在一氧化碳中毒引起的少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡中的可能作用機(jī)制,選用C57BL/6小鼠建立一氧化碳中毒模型,40只雄性小鼠完全隨機(jī)分為5組(n=8):正常對照組(不給予CO氣體)、CO染毒后1d組,CO染毒后3 d組,CO染毒后7 d組,CO染毒后14 d組(CO染毒組均給予2 500~3 000 ppm CO氣體,40min)。通過免疫組織化學(xué)染色方法和蛋白免疫印跡法檢測小鼠腦組織內(nèi)髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)和少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2(oligodendrocyte transcription factor2,Olig2)的表達(dá),評價一氧化碳中毒后的髓鞘脫失及少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡程度;通過tunel凋亡相關(guān)檢測及透射電鏡證實(shí)少突膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡;采用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測小鼠腦白質(zhì)部位BNIP3蛋白、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase9,caspase 9)的表達(dá)情況。與對照組相比,MBP在染毒后1 d表達(dá)開始降低(P0.05),3 d后表達(dá)持續(xù)降低(P0.01),7 d后降至最低(P0.01),直至14 d后其表達(dá)有所回升(P0.05),但仍低于對照組。采用蛋白免疫印跡法進(jìn)行MBP的表達(dá)變化分析,與對照組比較,1 d組開始降低(P0.01),3 d組持續(xù)降低(P0.01),7 d組降到最低(P0.01),14 d組有一定恢復(fù)(P0.01)。Olig2在一氧化碳染毒3 d后表達(dá)較對照組升高顯著(P0.01);與對照組比較,蛋白免疫印跡中3d組顯著升高(P0.01)。采用tunel凋亡相關(guān)檢測胼胝體區(qū)凋亡細(xì)胞的陽性數(shù)百分比,與對照組比較,1 d組開始升高(P0.01),3 d組持續(xù)升高(P0.01),7 d組凋亡最明顯(P0.01),14 d組凋亡陽性細(xì)胞百分比同樣高于對照組(P0.01)。透射電鏡結(jié)果顯示胼胝體區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞在一氧化碳染毒后存在凋亡現(xiàn)象。與對照組相比,BNIP3在染毒后1 d組表達(dá)量明顯增高(P0.01),在3 d后開始降低(P0.01),至14 d后恢復(fù)正常(P0.05)。與對照組相比,Bax在染毒后1 d組表達(dá)明顯增加(P0.01),隨后的3 d(P0.01)和7 d組(P0.05)開始降低,至14 d組恢復(fù)正常(P0.05)。與對照組相比,caspase9在染毒后1 d組明顯增加(P0.01),3 d后降低(P0.01),7 d后恢復(fù)正常(P0.05),其表達(dá)變化趨勢與BNIP3基本相同。綜上所述,BNIP3參與了CO中毒引起的少突膠質(zhì)細(xì)胞caspase依賴性線粒體凋亡途徑。
【學(xué)位單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：D919
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略詞表
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 急性一氧化碳中毒遲發(fā)型腦病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展
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致謝
個人簡歷

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本文編號：2879275