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桑葉活性部位對2型糖尿病microRNA調控效應研究

發(fā)布時間:2025-05-29 06:05
  目的:糖尿病是一種多病因、復雜的代謝紊亂性疾病,伴隨極高的致殘率和致死率,與癌癥、心血管疾病并稱為世界三大疾病。西藥治療雖能有效地快速的控制高血糖,但不足之處是對慢性并發(fā)癥的預防和治療仍缺乏有效措施,除此之外,連續(xù)服用口服降糖藥物會出現藥物失效、高胰島素血癥和胰島素抵抗等問題。而中藥因多成分、多靶點、多種作用機制等特點,從而產生一個或多個顯著的整體藥理作用,共同產生藥效,符合糖尿病復雜的病理特點;并且具有療效穩(wěn)定、毒性小、不良反應少可長期使用等優(yōu)勢。近年來,在糖尿病的預防和治療研究中甚為活躍。自古以來,歷代醫(yī)書都有桑葉治療消渴癥的記載,如《本草綱目》有載"桑葉乃手、足陽明之藥......止消渴",日本古書《吃茶養(yǎng)生記》也記載桑葉有改善"飲水病"(即現代醫(yī)學的糖尿病)的作用。研究已經證實,microRNA(miRNA)通過調控復雜的細胞信號通路網絡和對細胞的多方面生物學行為影響,直接或者間接參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展進程。鑒于此,本課題從整體、細胞和基因轉錄后調控水平三個層面,研究桑葉對2型糖尿病胰島β細胞功能的保護作用,并進一步探索miRNA介導細胞凋亡的相關性,從而闡明桑葉活性部位保護胰...

【文章頁數】:104 頁

【學位級別】:博士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻研究
    1.1 2 型糖尿病的發(fā)病機制
        1.1.1 遺傳因素
        1.1.2 環(huán)境因素
        1.1.3 胰島素抵抗與胰島素分泌缺陷
        1.1.4 其他因素
        1.1.5 總結
    1.2 β細胞損傷與2型糖尿病的關系
        1.2.1 高糖高脂
        1.2.2 氧化應激
        1.2.3 內質網應激
        1.2.4 總結
    1.3 與2型糖尿病調控效應相關的miRNA的研究進展
        1.3.1 miRNA對胰島β細胞功能的影響
        1.3.2 miRNA調節(jié)胰島素的釋放
        1.3.3 miRNA與胰島素抵抗
        1.3.4 總結
    1.4 桑葉與2型糖尿病的關系
        1.4.1 桑葉生物堿
        1.4.2 桑葉總多糖
        1.4.3 桑葉總黃酮
        1.4.4 總結
第二章 桑葉活性部位的制備工藝研究
    2.1 儀器與材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 桑葉總黃酮的制備工藝研究
        2.2.2 桑葉總生物堿的制備工藝研究
        2.2.3 桑葉總多糖的制備工藝研究
    2.3 結果與分析
        2.3.1 桑葉總黃酮制備工藝的確證
        2.3.2 桑葉總生物堿制備工藝的確證
        2.3.3 桑葉總多糖制備工藝的確證
    2.4 討論
第三章 桑葉活性部位對2型糖尿病大鼠胰島β細胞保護作用的研究
    3.1 儀器與材料
        3.1.1 儀器
        3.1.2 材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 2型糖尿病動物模型的制備
        3.2.2 實驗設計和分組
        3.2.3 日常觀察指標
        3.2.4 空腹血糖的測定
        3.2.5 大鼠血液樣品的采集
        3.2.6 組織臟器標本的取材
        3.2.7 組織HE染色及形態(tài)學觀察
        3.2.8 胰腺組織形態(tài)學電鏡觀察
        3.2.9 統(tǒng)計學處理
    3.3 結果與分析
        3.3.1 日常觀察指標
        3.3.2 空腹血糖的測定
        3.3.3 空腹胰島素水平的測定
        3.3.4 桑葉活性部位對T2DM大鼠組織病理形態(tài)學的改變
    3.4 討論
        3.4.1 桑葉活性部位正常對照組設立的意義
        3.4.2 桑葉活性部位對胰島β細胞的影響以及對2型糖尿病多靶點的改善作用
第四章 桑葉活性部位對大鼠INS-1細胞凋亡保護作用的microRNA機制研究
    4.1 儀器與材料
        4.1.1 儀器
        4.1.2 材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 INS-1細胞常規(guī)培養(yǎng)
        4.2.2 INS-1細胞活性檢測
        4.2.3 流式細胞儀Annexin V/PI雙染法分析細胞早期凋亡率
        4.2.4 熒光定量RT-PCR檢測細胞Bcl-2、Bax、caspase3 mRNA的表達
        4.2.5 INS-1細胞microRNA微陣列芯片檢測
        4.2.6 差異表達的microRNAs生物學分析
        4.2.7 候選靶基因KEGG生物通路富集分析
        4.2.8 候選靶基因Gene Ontology(GO)基因功能富集分析
        4.2.9 構建miRNAs與靶基因的調控網絡
        4.2.10 miRNA基因芯片結果的PCR驗證
    4.3 結果與分析
        4.3.1 桑葉提取物對INS-1細胞活性的影響
        4.3.2 桑葉活性部位對INS-1細胞凋亡的影響
        4.3.3 Bcl-2、Bax、caspase3基因實時熒光定量PCR檢測
        4.3.4 INS-1細胞microRNA提取的質量檢測
        4.3.5 桑葉活性部位干預后INS-1細胞差異miRNAs表達譜
        4.3.6 INS-1細胞基因芯片候選miRNAs的預測
        4.3.7 miRNA基因芯片結果在INS-1細胞的PCR驗證
        4.3.8 miRNA基因芯片結果在T2DM大鼠胰腺組織上的PCR驗證
        4.3.9 生物信息學分析
    4.4 討論
結語與展望
參考文獻
在校期間發(fā)表論文情況
統(tǒng)計學審核證明
致謝



本文編號:4048845

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