目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制。方法利用神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞為神經(jīng)元樣細(xì)胞并通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)鑒定;誘導(dǎo)后細(xì)胞分為空白組(無(wú)干預(yù)措施)、模型組[2μmol/L毒胡蘿卜素(TG)]、脊髓康組(2μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物凍干粉,合生藥0.625 g/mL);CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞24、48、72 h增殖活性,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡狀態(tài),Western Blot與q-PCR檢測(cè)1型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)膜蛋白激酶(IRE1)、X盒結(jié)合蛋白1(XBP1)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Grp78)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白及mRNA表達(dá)情況,透射電鏡掃描各組細(xì)胞觀察細(xì)胞及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)學(xué)特征。結(jié)果與空白組比較,模型組NGF誘導(dǎo)的神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞增殖活性顯著降低(P<0.05),晚期凋亡明顯增高(P<0.01),電鏡掃描顯示其細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)腫脹,囊泡化,呈典型的細(xì)胞凋亡形態(tài);Grp78、CHOP蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05),XBP1及IRE1蛋白表達(dá)也...

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圖1 PC12細(xì)胞及NGF誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元樣細(xì)胞

使用倒置顯微鏡觀察經(jīng)NGF培養(yǎng)7天后的PC12細(xì)胞,可見(jiàn)PC12細(xì)胞胞體呈三角形、梭形,突起較前明顯變長(zhǎng),貼壁樣生長(zhǎng),已具有神經(jīng)元樣形態(tài)。使用流式細(xì)胞測(cè)定MAP2和NSE表達(dá)陽(yáng)性率,結(jié)果顯示MAP2平均陽(yáng)性率為(62.54±1.00)%,NSE平均陽(yáng)性率為(93.32±2.87)....

圖2 MAP2和NSE表達(dá)的陽(yáng)性率

與空白組比較,模型組24、48、72hOD值均降低(P<0.01);與模型組比較,JSK干預(yù)24、48、72h后OD值均顯著增高(P<0.05)。圖3各組CCK8檢測(cè)神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞的OD值比較

圖3 各組CCK8檢測(cè)神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞的OD值比較

圖2MAP2和NSE表達(dá)的陽(yáng)性率3各組PC12細(xì)胞凋亡情況比較(圖4)

圖4 各組神經(jīng)元樣PC12凋亡率比較

與空白組比較,模型組細(xì)胞的晚期凋亡率明顯增高(P<0.01),與模型組比較,JSK干預(yù)PC12細(xì)胞后晚期凋亡率及早期凋亡率均明顯降低(P<0.05,P<0.01)。4各組神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞XBP1、IRE1、Grp78、CHOP蛋白表達(dá)比較(圖5)

本文編號(hào)：4053674