腫瘤相關(guān)巨噬細胞是浸潤于腫瘤組織中的一類巨噬細胞,也是腫瘤微環(huán)境中最多的免疫細胞。在結(jié)直腸癌的環(huán)境中,巨噬細胞不僅浸潤于腫瘤微環(huán)境中,也暴露于腸道的復(fù)雜環(huán)境中,表現(xiàn)出極大的異質(zhì)性。我們通過單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),解析結(jié)直腸癌微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細胞的圖譜,以研究巨噬細胞的異質(zhì)性。我們通過AOM/DSS誘導(dǎo)ApcMin雜合子小鼠,成功構(gòu)建了小鼠炎癥相關(guān)的結(jié)直腸癌腫瘤模型。我們通過酶消化法,制備不同組織的單細胞懸液。我們首先對小鼠腫瘤和癌旁組織進行單細胞測序,后利用流式細胞術(shù)分選出腫瘤中CD11b+髓系細胞,再進行單細胞轉(zhuǎn)錄組測序,共得到六組數(shù)據(jù)。通過對六組數(shù)據(jù)的分別分析以及合并分析,研究其基因表達特征,通過可視化方法分析,展示了細胞簇之間的異質(zhì)性,并發(fā)現(xiàn)巨噬細胞簇主要來源于單核細胞。我們還表征了兩個CX3CR1+的巨噬細胞細胞亞群,其表達特征與單核細胞來源的結(jié)腸巨噬細胞的極化特征相似。分析表明許多巨噬細胞簇同時表達M1型和M2型巨噬細胞的基因標記,處于M1/M2細胞型的中間狀態(tài)。按照Vegfa的表達水平可以將巨噬細胞簇為高、中、低三類。Vegfa表達高的細胞簇除了表達巨噬細胞簇的特征分子也...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠周期

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-13-12000xg離心1分鐘，洗脫DNA，后測DNA的濃度。后進行PCR鑒定小鼠的基因型。(7)基因鑒定體系如表2-1，PCR參數(shù)如表2-2。引物序列如下。F:CATCTGCGAGATGATTTGTGAGR:TTTCTTTGTGCTGAACTTG....

圖2-2AOM/DSS誘導(dǎo)過程中小鼠的體重變化(n=6)

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-16-2.3.6細胞的流式細胞分選(1)流式細胞分選，每組需要設(shè)置空白對照。實驗組進行抗體標記處理。(2)500xg4℃離心5分鐘，棄上清，加入TruStainFcX抗體，避光孵育10分鐘，封閉掉細胞表面的Fc受體。每106個細胞加入的體積為2μL....

圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-17-PCR擴增所得條帶的大小為1191bp。由圖2-3可知擴增出條帶位于1000和2000的條帶之間，且條帶位置與陽性對照一致，則證明該鼠為ApcMin小鼠。圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖我們用小鼠的血液，利用其物理參數(shù)，驗證CD11b....

圖2-4CD45+CD11b+FSC-SSC流式分析圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-17-PCR擴增所得條帶的大小為1191bp。由圖2-3可知擴增出條帶位于1000和2000的條帶之間，且條帶位置與陽性對照一致，則證明該鼠為ApcMin小鼠。圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖我們用小鼠的血液，利用其物理參數(shù)，驗證CD11b....

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