肝癌(HCC)已成為全球第二大癌癥相關(guān)的死亡病因,根據(jù)2015年全國癌癥統(tǒng)計(jì)分析,肝癌占國內(nèi)惡性腫瘤發(fā)病率的五分之一,已成為嚴(yán)重威脅我國人民健康和生命的一大殺手。據(jù)統(tǒng)計(jì),90%以上的肝癌是原發(fā)性肝癌,可由慢性乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、酗酒、或與糖尿病和肥胖相關(guān)的代謝性疾病所誘發(fā)。手術(shù)切除,肝移植,放療及藥物化療是目前治療肝癌的常見方式,而手術(shù)切除仍是治療肝癌最有效的手段。但是由于肝癌的高轉(zhuǎn)移潛能和腫瘤新生血管的侵犯,臨床上只有不足20%的患者能行手術(shù)切除,并且肝癌的高復(fù)發(fā)性又導(dǎo)致患者術(shù)后5年的生存率不到30%,這一現(xiàn)象是目前困擾臨床治療的一大難題。研究認(rèn)為肝癌的高轉(zhuǎn)移性和異常激活的血管生成,是導(dǎo)致肝癌患者術(shù)后易復(fù)發(fā)及低生存率的主要原因。因此研究闡明調(diào)控肝癌轉(zhuǎn)移和異常血管新生的原因及探究肝癌治療新的靶點(diǎn),是目前急需解決的問題,同時(shí)也具有非常重要的意義。腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1(TNFAIP1),又稱B12或BACURD2,是一種可由TNF-α或LPS誘導(dǎo)的蛋白,在參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、DNA合成、免疫、神經(jīng)元發(fā)育和阿爾茲海默疾病中,起重要的調(diào)控作用。然而,T...

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.前言
2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 病人組織樣本
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        2.3.4 質(zhì)粒構(gòu)建及質(zhì)粒提取
        2.3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.6 構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
        2.3.7 RNA提取和熒光定量PCR(RT-qPCR)
        2.3.8 Western blot分析
        2.3.9 免疫組化和評(píng)分
        2.3.10 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.3.11 免疫熒光
        2.3.12 免疫共沉淀
        2.3.13 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)
        2.3.14 蛋白質(zhì)純化和GST-pull down
        2.3.15 泛素化分析
        2.3.16 細(xì)胞增殖和TUNEL分析
        2.3.17 Trans well分析
        2.3.18 血管生成實(shí)驗(yàn)
        2.3.19 肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)
        2.3.20 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.3.21 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 TNFAIP1 在肝癌組織中低表達(dá)
    3.2 TNFAIP1 在肝癌轉(zhuǎn)移組織和肝癌細(xì)胞中低表達(dá)
    3.3 TNFAIP1 抑制肝癌細(xì)胞增殖和成瘤
    3.4 TNFAIP1 促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡
    3.5 TNFAIP1 抑制肝癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移
    3.6 TNFAIP1 下調(diào)與細(xì)胞增殖,遷移和侵襲相關(guān)基因的表達(dá)
    3.7 TNFAIP1 抑制肝癌血管生成
    3.8 TNFAIP1 下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)
    3.9 TNFAIP1 通過阻斷NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性抑制肝癌的進(jìn)展
    3.10 .TNFAIP1與CSNK2B相互作用,促進(jìn)其泛素介導(dǎo)的降解,抑制CSNK2B依賴的NF-κB轉(zhuǎn)錄激活
        3.10.1 TNFAIP1與CSNK2B存在相互作用
        3.10.2 CSNK2B促進(jìn)NF-κB通路的轉(zhuǎn)錄激活
        3.10.3 TNFAIP1 下調(diào)CSNK2B的表達(dá)
        3.10.4 TNFAIP1-Cul3 復(fù)合物促進(jìn)CSNK2B泛素介導(dǎo)的降解
        3.10.5 TNFAIP1 下調(diào)CSNK2B抑制NF-κB通路
    3.11 .過表達(dá)CSNK2B逆轉(zhuǎn)TNFAIP1 對(duì)肝癌的作用
    3.12 臨床肝癌標(biāo)本中TNFAIP1與CSNK2B的相關(guān)性分析
4 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
英文縮寫表
致謝



本文編號(hào)：4049336