癌癥是細(xì)胞的生長、增殖和凋亡的紊亂引起的一種疾病。近期研究發(fā)現(xiàn),癌癥的發(fā)生與細(xì)胞內(nèi)膽固醇的水平相關(guān),并且利用降膽固醇以及抑制脂滴形成的藥物能夠治療多種癌癥。24-脫氫膽固醇還原酶(3β-hydroxysterol D24-reductase,DHCR24)是膽固醇生物合成過程中的最后一步的酶,催化鏈甾醇還原成膽固醇。然而DHCR24在癌癥中的分子機(jī)制研究還不多見。因此本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,通過分析DHCR24相互作用組,利用Duolink等蛋白質(zhì)組學(xué)的手段,以確定DHCR24在癌癥中可能發(fā)生的相互作用的蛋白,并通過細(xì)胞實驗來推測DHCR24及其相互作用蛋白在癌癥發(fā)生發(fā)展中的重要作用。首先,利用實驗室早期得到的免疫共沉淀質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及四個公開的蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了DHCR24相互作用蛋白組,并通過對其進(jìn)行細(xì)胞通路分析發(fā)現(xiàn),DHCR24相互作用組主要富集于癌癥發(fā)生發(fā)展相關(guān)通路,并且通過PPI網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn),DHCR24對癌癥發(fā)生發(fā)展的影響可能是通過HRAS來實現(xiàn)的。GEPIA在線分析顯示DHCR24在多種癌癥的患者中顯著上調(diào)表達(dá),而且DHCR24的表達(dá)與HRAS的表達(dá)在癌癥中具有相關(guān)性...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
    0.1 膽固醇與癌癥
        0.1.1 膽固醇代謝和穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)
        0.1.2 癌癥中膽固醇的重編程
        0.1.3 膽固醇調(diào)控在癌癥治療中的作用
    0.2 24-脫氫膽固醇還原酶結(jié)構(gòu)和功能
        0.2.1 DHCR24的結(jié)構(gòu)
        0.2.2 DHCR24功能
        0.2.3 DHCR24相互作用蛋白研究
    0.3 RAS與癌癥
        0.3.1 RAS結(jié)構(gòu)和功能
        0.3.2 RAS調(diào)控在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用
    0.4 蛋白質(zhì)組學(xué)
    0.5 研究目的及意義
第一章 DHCR24相互作用蛋白數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建及相互作用網(wǎng)絡(luò)分析
    1.1 實驗方法
        1.1.1 構(gòu)建DHCR24 蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行KEGG分析。
        1.1.2 構(gòu)建DHCR24 蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫的PPI網(wǎng)絡(luò)并尋找可能的相互作用蛋白
        1.1.3 GEPIA在線分析DHCR24 基因在癌癥中的表型
    1.2 結(jié)果與討論
        1.2.1 蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫KEGG分析顯示DHCR24 可能參與了癌癥的發(fā)生發(fā)展
        1.2.2 PPI網(wǎng)絡(luò)分析顯示DHCR24 可能能夠與HRAS發(fā)生相互作用
        1.2.3 DHCR24在多種癌癥中高表達(dá)且與患者的生存相關(guān)。
    1.3 結(jié)論
第二章 DHCR24與HRAS相互作用研究
    2.1 實驗方法
        2.1.1 計算機(jī)模擬DHCR24與HRAS相互作用
        2.1.2 細(xì)胞水平驗證DHCR24與HRAS相互作用
    2.2 實驗結(jié)果與討論
        2.2.1 多模板同源建模獲得DHCR24蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)
        2.2.2 ZDOCK對接結(jié)果顯示DHCR24 能夠與活化后的HRAS發(fā)生相互作用
        2.2.3 Duolink技術(shù)結(jié)果證明在EGF刺激后的5637 細(xì)胞中DHCR24 能夠與HRAS發(fā)生相互作用
    2.3 結(jié)論
第三章 DHCR24與HRAS相互作用在癌癥發(fā)病中的作用
    3.1 .實驗材料
        3.1.1 生化試劑和耗材
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 DHCR24與HRAS相互作用對癌癥細(xì)胞生長的影響
        3.2.2 Filipin染色驗證DHCR24與HRAS相互作用對5637 細(xì)胞細(xì)胞膜上膽固醇含量的影響
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 DHCR24 抑制劑U18666A能夠抑制5637 癌細(xì)胞增殖
        3.3.2 EGF能夠促進(jìn)5637細(xì)胞合成膽固醇
        3.3.3 U18666A與 lonafarnib均能夠抑制5637 癌細(xì)胞中EGF引發(fā)的膽固醇合成
    3.4 結(jié)論
第四章 討論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間學(xué)術(shù)論文及參加科研情況



本文編號：4053446