產(chǎn)酶溶桿菌(Lysobacter enzymogenes)屬溶桿菌屬(Lysobacter)、黃單胞科(Xanthomonadaceae),在環(huán)境中普遍存在,是一種新型的潛在植物病害生防細(xì)菌,可以產(chǎn)生許多具有重要生物活性的次生代謝產(chǎn)物,例如熱穩(wěn)定性抗真菌因子HSAF (Heat Stable Antififungal Factor)、抗革蘭氏陽性細(xì)菌物質(zhì)WAP-8294A2以及抗光氧化的多烯類色素等,而目前這些物質(zhì)生物合成的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。已有研究表明在野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc)中存在依賴于DSF(Diffusible Signal Factor)和DF(Diffusible Factor)的兩種群體感應(yīng)系統(tǒng),參與調(diào)控細(xì)菌許多的生物學(xué)功能,如存活力、抗氧化壓力、致病性等。產(chǎn)酶溶桿菌與野油菜黃單胞菌同屬黃單胞科(Xanthomonadaceae),我們擬探究在產(chǎn)酶溶桿菌中是否也存在這兩種群體感應(yīng)系統(tǒng),如果存在,是否參與調(diào)控HSAF等次生代謝產(chǎn)物的生物合成。本研究以O(shè)H11菌株為研究對象,明確了在產(chǎn)酶溶桿菌中也存在...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 產(chǎn)酶溶桿菌的研究進(jìn)展
        1 產(chǎn)酶溶桿菌的分類地位
        2 產(chǎn)酶溶桿菌的生化特性
        3 產(chǎn)酶溶桿菌對植物病害的生防機(jī)理
            3.1 胞外水解酶
            3.2 熱穩(wěn)定抗真菌因子HSAF(Heat-Stable Antifungal Factor)
            3.3 WAP-8294A
    第二章 細(xì)菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)
        1 群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum Sensing System)
        2 依賴DSF的群體感應(yīng)系統(tǒng)
            2.1 DSF群體感應(yīng)信號分子的發(fā)現(xiàn)
            2.2 DSF群體感應(yīng)信號分子的結(jié)構(gòu)
            2.3 DSF群體感應(yīng)信號分子參與調(diào)控的生物學(xué)功能
            2.4 DSF群體感應(yīng)信號分子的傳導(dǎo)通路及調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        3 依賴DF的群體感應(yīng)系統(tǒng)
            3.1 DF群體感應(yīng)信號分子的發(fā)現(xiàn)
            3.2 DF群體感應(yīng)信號分子的結(jié)構(gòu)
            3.3 DF群體感應(yīng)信號分子參與調(diào)控的生物學(xué)功能
            3.4 DF與DSF兩種群體感應(yīng)信號分子的累積效應(yīng)
        4 本研究的目的及意義
下篇 研究內(nèi)容
    1 實驗材料
        1.1 菌株、質(zhì)粒和引物
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶、試劑盒和化學(xué)試劑
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)菌基因組DNA的提取
        2.2 質(zhì)粒的提取
        2.3 DNA操作方法和體系
        2.4 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.5 缺失突變體的構(gòu)建
        2.6 lenB2互補(bǔ)菌株和空載體對照菌株的構(gòu)建
        2.7 AxanB2的lenB2互補(bǔ)菌株和空載體對照菌株的構(gòu)建
        2.8 lenB2基因是不是一個合成酶證明
        2.9 DF的提取及HPLC檢測
        2.10 黃色素的提取及測定
        2.11 次生代謝產(chǎn)物HSAF、WAP-8294A2的提取及HPLC檢測
        2.12 菌落形態(tài)觀察
        2.13 四種胞外酶檢測
        2.14 相對實時熒光定量PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.15 lenB2基因的基因芯片分析
        2.16 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果分析
        3.1 L.enzymobacter OH11中xanB2與rpfF同源基因的鑒定
        3.2 lenB2敲除突變體及l(fā)enB2與rpfF_OH11雙敲除突變體的構(gòu)建
        3.3 互補(bǔ)菌株的構(gòu)建
        3.4 LenB2是DF生物合成的關(guān)鍵酶
        3.5 LenB2/DF與RpFF_OH11/DSF參與調(diào)控黃色素的生物合成
        3.6 LenB2/DF與RpfF_OH11/DSF正向平行調(diào)控HSAF的生物合成
        3.7 LenB2/DF與RpfF_OH11/DSF正向平行調(diào)控WAP-8294A2的生物合成
        3.8 RpfF_OH11/DSF參與調(diào)控細(xì)菌的菌落形態(tài)
        3.9 LenB2/DF與RpfF_OH11/DSF不參與調(diào)控胞外酶的生物合成
        3.10 LenB2/DF和RpfF_OH11/DSF是全局性調(diào)控因子
    4. 討論
    5. 研究總結(jié)
    6. 創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
附錄一 產(chǎn)酶溶桿菌受DF調(diào)控基因的鑒定及功能分類
附錄二 產(chǎn)酶溶桿菌受DSF調(diào)控基因的鑒定及功能分類
附錄三 產(chǎn)酶溶桿菌受DF/DSF共同調(diào)控基因的鑒定及功能分類
附錄四     qRT-PC民與基因芯片相關(guān)基因表達(dá)量的結(jié)果比較
攻讀碩士期間發(fā)表的論文
致謝
本論文研究受資助項目



本文編號：4055247