【目的】為篩選出香梨優(yōu)斑螟(Euzophera pyriella)在低溫脅迫下合適的內(nèi)參基因,并明確低溫脅迫對熱激蛋白基因表達(dá)的影響。【方法】從梨園采集香梨優(yōu)斑螟5齡幼蟲,于4℃處理0、0.25、1、3、8、12、18、24 h,以實時熒光定量技術(shù)測定內(nèi)參基因及熱激蛋白基因的表達(dá)豐度,利用ΔCt法、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder軟件綜合評價5個內(nèi)參基因的穩(wěn)定性,進(jìn)一步分析低溫處理后熱激蛋白(HSP70和HSP90)基因表達(dá)規(guī)律�！窘Y(jié)果】△Ct和Normfinder方法的內(nèi)參基因穩(wěn)定性為UBQ>GAPDH>Actin>18s>TUB,BestKeeper方法中18s和UBQ基因表現(xiàn)最為穩(wěn)定,GeNorm認(rèn)為Actin和GAPDH穩(wěn)定性好,其次是UBQ,RefFinder綜合評價穩(wěn)定性UBQ最高,其次為GAPDH,而穩(wěn)定性最差的是TUB。以UBQ為內(nèi)參基因,發(fā)現(xiàn)熱激蛋白家族中HSP70和HSP90基因相對表達(dá)量都是在1 h處理時達(dá)到峰值、然后下降,在18 h后有小幅度上升,維持在較高的水平,總體上表達(dá)呈現(xiàn)顯著的先上升后下...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖1 內(nèi)參基因Ct值變化趨勢

Ct法計算結(jié)果UBQ分值最小,其次為GAPDH,TUB基因的分值最高、穩(wěn)定性最差(圖2-A)。NormFinder軟件分析的穩(wěn)定性為UBQ>GAPDH>Actin>18s>TUB(圖2-B)。GeNorm以參數(shù)M=1.5為閾值來判斷基因的穩(wěn)定性,小于1.5時表明該基因穩(wěn)定性良好,....

圖4 HSP90基因的相對表達(dá)量

HSP70基因經(jīng)過低溫脅迫處理后,其相對表達(dá)量分別是對照組的5.08、8.79、2.52、4.09、1.50、6.50、3.76倍,并于1h處理時達(dá)到峰值,HSP70基因相對表達(dá)量明顯高于對照,初期及24h末期顯著高于對照(圖3)。HSP90基因分別是對照組的4.01、12.....

圖2 內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性

表3BestKeeper軟件分析內(nèi)參基因穩(wěn)定性Table3ExpressionstabilityofreferencegenesbyBestKeeper基因Gene幾何平均值Geomean算數(shù)平均值A(chǔ)rMean最小值Min最大值Max標(biāo)準(zhǔn)差S....

圖3 HSP70基因的相對表達(dá)量

2.4低溫處理下HSP70和HSP90基因表達(dá)特征HSP70基因經(jīng)過低溫脅迫處理后,其相對表達(dá)量分別是對照組的5.08、8.79、2.52、4.09、1.50、6.50、3.76倍,并于1h處理時達(dá)到峰值,HSP70基因相對表達(dá)量明顯高于對照,初期及24h末期顯著高于對照(....

本文編號：4054708