發(fā)布時(shí)間：2024-12-19 04:25

　　 本研究使用不同的轉(zhuǎn)錄終止子分別構(gòu)建了6種重組菌,使其通過(guò)木糖誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)了麥芽糖淀粉酶基因的表達(dá)。其中B. subtilis WB600(T5)菌株粗酶液活力最高,達(dá)到161.49 U/mL,單位菌體酶活相對(duì)于對(duì)照菌提高了63.9%。對(duì)6種重組菌的發(fā)酵液使用蛋白電泳分析,發(fā)現(xiàn)粗酶分子量大小大約為67 kDa,與理論值一致。針對(duì)生長(zhǎng)最好的B. subtilis WB600(T1)進(jìn)行簡(jiǎn)單的發(fā)酵優(yōu)化,考察了培養(yǎng)基中不同的碳源對(duì)重組菌生長(zhǎng)及產(chǎn)酶的影響,最終得出結(jié)論,當(dāng)碳源為麥芽糊精時(shí)是菌體生長(zhǎng)最好,此時(shí)B. subtilis WB600(T1)酶活力也最高為160.91 U/mL,相對(duì)于未進(jìn)行優(yōu)化的菌的酶活力提高了40.9%,單位蛋白酶活提高了76.8%。

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【部分圖文】：

圖1 終止子PCR電泳圖

從NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中分別預(yù)測(cè)得到6種芽孢桿菌來(lái)源的不同轉(zhuǎn)錄終止子序列，如表1所示。將構(gòu)建的質(zhì)粒pHY300用NruΙ單酶切得到載體，構(gòu)建的質(zhì)粒pHY-BLMA分別用6種終止子PCR擴(kuò)增得到目的片段，將PCR產(chǎn)物純化后與載體連接得到重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化E.coliJM109，挑取....

圖2 菌落PCR電泳圖

根據(jù)表2中的重組菌株的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)野生菌沒(méi)有酶活，而原始菌以及重組菌均有酶活，說(shuō)明在原始菌及重組菌內(nèi)都有淀粉酶的表達(dá)。發(fā)酵24h后野生菌的菌體量最多，而重組菌的菌體量相對(duì)于原始菌的較少，但重組菌的蛋白濃度有所提高，酶活有小幅度的增加，單位菌體量上的酶活有較大的提高。由于酶活提高的....

本文編號(hào)：4017653