目的探討IGF-1過(guò)表達(dá)的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)缺氧時(shí)小鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法以小鼠BMSCs為研究對(duì)象,利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),構(gòu)建過(guò)表達(dá)IGF-1的BMSCs(IGF-1-BMSCs)及其對(duì)照細(xì)胞(NC-BMSCs)。與正常培養(yǎng)相比,1%氧濃度構(gòu)建低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡模型。流式細(xì)胞術(shù)觀察低氧誘導(dǎo)對(duì)BMSCs及心肌細(xì)胞凋亡率的影響;流式細(xì)胞術(shù)觀察加入IGF-1-BMSCs上清液時(shí)低氧誘導(dǎo)對(duì)心肌細(xì)胞凋亡率的影響; Western blotting檢測(cè)低氧模型細(xì)胞內(nèi)Bcl-2家族促凋亡蛋白(Bax)及抗凋亡蛋白(Bcl-2)、Caspase家族蛋白(caspase-3、8、9)及細(xì)胞色素C(Cyto C)的表達(dá)。結(jié)果與NC-BMSCs細(xì)胞對(duì)比,低氧誘導(dǎo)時(shí)IGF-1-BMSCs細(xì)胞的凋亡率明顯下降[(36.85±1.02)%vs (15.66±4.36)%,P <0.05],抗凋亡蛋白Bcl-2明顯增加,而促凋亡蛋白Bax、caspase-3、caspase-8及細(xì)胞色素C的釋放明顯減少(P <0.05)。與正常培養(yǎng)相比,低氧處理顯著誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡[(10.89±...

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圖1 IGF-1過(guò)表達(dá)慢病毒感染的原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

結(jié)果表明，慢病毒感染BMSCs后IGF-1病毒感染率在96%±3%以上(見圖1)。IGF-1-BMSCs組中IGF-1表達(dá)量與對(duì)照組(NC-BMSCs)相比，明顯增加(P<0.05，見圖1)。表明構(gòu)建過(guò)表達(dá)IGF-1的BMSCs細(xì)胞成功。2.3低氧誘導(dǎo)對(duì)BMSCs的凋亡率的影響

圖2 Western blot檢測(cè)低氧誘導(dǎo)條件下培養(yǎng)48 h凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平

低氧誘導(dǎo)時(shí)，小鼠BMSCs細(xì)胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平顯著下降，而促凋亡蛋白Bax、細(xì)胞色素C(CytoC)、caspase-3及caspase-8的表達(dá)水平則明顯上調(diào);過(guò)表達(dá)IGF-1則可以顯著提升Bcl-2水平，而抑制Bax、細(xì)胞色素C(CytoC)、caspas....

圖3 Western blot檢測(cè)IGF-1-BMSCs培養(yǎng)液對(duì)低氧誘導(dǎo)時(shí)心肌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響

為了進(jìn)一步確定IGF-1-BMSCs分泌物是否對(duì)心肌細(xì)胞凋亡通路產(chǎn)生影響。加入或者不加入BMSCs上清液后的低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞裂解后進(jìn)行了Westernblot檢測(cè)，結(jié)果表明:低氧處理的心肌細(xì)胞，與正常培養(yǎng)相比，Bcl-2的表達(dá)水平顯著下降，而Bax、CytoC、caspas....

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