發(fā)布時間：2025-03-20 00:56

　　隨著不斷的工業(yè)生產(chǎn)和生活中的廣泛應(yīng)用,持久性有機(jī)污染物(Persistent Organic Pollutants,簡稱POPs)由于其穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì),具有持久性,生物累積性,長距離遷移性,半揮發(fā)性,高毒性等特點,嚴(yán)重威脅人類健康并造成全球性的生態(tài)環(huán)境問題。例如多溴聯(lián)苯醚(PBDE)主要通過空氣,水及食物這三條途徑進(jìn)入人體。作為一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,它具有類雌激素的作用,可對人體的內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、甲狀腺、大腦、腎臟和肝臟等組織器官產(chǎn)生潛在的危害。因此建立一個有效的體外有機(jī)物毒性篩選平臺至關(guān)重要。目前傳統(tǒng)的化合物毒性篩查包括基于分子水平、細(xì)胞水平和動物模型等方法。相對于耗時耗力、花費較高的動物實驗,體外細(xì)胞實驗成為有毒物質(zhì)毒性測試的一種快速篩查方法,也是毒性數(shù)據(jù)不可缺少的一部分。然而當(dāng)前細(xì)胞水平的毒性分析方法仍然存在著弊端。例如傳統(tǒng)毒性篩查方法多為終點式,無法在較長周期的化合物暴露下實時的監(jiān)測細(xì)胞的細(xì)微變化。癌化細(xì)胞系由于累積的基因突變其生物學(xué)效應(yīng)與原代細(xì)胞可能不同。同時相對于傳統(tǒng)的二維細(xì)胞培養(yǎng),三維細(xì)胞培養(yǎng)可模擬細(xì)胞在體內(nèi)的生長狀態(tài),更真實的反應(yīng)物質(zhì)在胞外基質(zhì)等微環(huán)境中傳輸?shù)倪^程,...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 持久性有機(jī)污染物的分類及危害
    1.2 有機(jī)物的毒性篩查
        1.2.1 常規(guī)檢測方法
        1.2.2 干細(xì)胞毒理學(xué)
    1.3 擬胚體
        1.3.1 胚胎干細(xì)胞
        1.3.2 擬胚體及其獨特的生物反應(yīng)機(jī)制
        1.3.3 擬胚體的制備方法分類
    1.4 細(xì)胞內(nèi)傳感器
        1.4.1 細(xì)胞內(nèi)傳感器分類
        1.4.2 基于PLGA的胞內(nèi)可降解傳感器
    1.5 本論文的主要工作與意義
第二章 構(gòu)建熒光納米傳感器標(biāo)記的3D擬胚體及其細(xì)胞活性與活性氧檢測
    2.1 引言
    2.2 實驗試劑及儀器
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PLGA傳感器的可控制備
        2.3.2 表征PLGA傳感器的尺寸及形貌
        2.3.3 鋪被飼養(yǎng)層MEF培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞
        2.3.4 擬胚體的可控制備
        2.3.5 ECM基質(zhì)阻礙探針內(nèi)化
        2.3.6 PLGA@Calccein AM與PLGA@CellROX傳感器擬胚體內(nèi)特異性檢測
        2.3.7 PLGA傳感器延緩熒光信號衰減
        2.3.8 不同濃度PBDE-47暴露下傳感器監(jiān)測擬胚體內(nèi)細(xì)胞活性與活性氧
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 PLGA傳感器DLS及 TEM表征
        2.4.2 PLGA@calcein AM與PLGA@CellROX細(xì)胞內(nèi)特異性功能檢測
        2.4.3 PLGA傳感器延緩熒光信號衰減
        2.4.4 MEF細(xì)胞與小鼠胚胎干細(xì)胞表面形貌對比
        2.4.5 不同濃度的小鼠胚胎干細(xì)胞制備擬胚體
        2.4.6 ECM基質(zhì)阻礙探針內(nèi)化
        2.4.7 PBDE-47暴露下擬胚體內(nèi)細(xì)胞活性與活性氧變化
    2.5 本章小結(jié)
第三章 PLGA傳感器監(jiān)測PBDE-47暴露下擬胚體神經(jīng)分化相關(guān)基因變化
    3.1 引言
    3.2 實驗試劑及儀器
        3.2.1 實驗試劑
        3.2.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 β-actin MB與PAX-6 MB的設(shè)計
        3.3.2 β-actin MB與PAX6 MB體外功能性檢測
        3.3.3 基于分子信標(biāo)的PLGA傳感器的制備
        3.3.4 不同濃度PBDE-47暴露下傳感器監(jiān)測擬胚體神經(jīng)分化相關(guān)基因變化
        3.3.5 實時定量PCR驗證不同濃度暴露下擬胚體神經(jīng)分化相關(guān)基因變化
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 β-actin MB與PAX6 MB的示意圖與模擬結(jié)果
        3.4.2 β-actin MB與PAX-6 MB體外互補(bǔ)配對結(jié)果
        3.4.3 0.1μM與10μM濃度下PBDE-47 暴露下擬胚體神經(jīng)分化相關(guān)基因變化
        3.4.4 實時定量PCR結(jié)果驗證傳感器實驗結(jié)果
        3.4.5 PAX6與β-actin在 EB內(nèi)表達(dá)定位分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 基于DNA分子鏈修飾的Au納米球探針的設(shè)計與表征
    4.1 引言
    4.2 實驗試劑及儀器
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 分子鏈及Au納米傳感器的設(shè)計
        4.3.2 AuNPs的制備與表征
        4.3.3 DNA-AuNPs納米探針的制備與表征
        4.3.4 DNA-AuNPs探針體外功能性驗證
        4.3.5 DNA-AuNPs納米探針細(xì)胞內(nèi)檢測
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 DNA-AuNPs納米探針結(jié)構(gòu)示意圖
        4.4.2 Au納米球與DNA-AuNPs納米探針尺寸表征
        4.4.3 DNA-AuNPs納米探針體外功能檢測
        4.4.4 DNA-AuNPs納米探針細(xì)胞內(nèi)檢測
    4.5 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間撰寫的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間申請的專利
致謝



本文編號：4037126