目的通過調(diào)整晝夜明暗交替的時間,研究晝夜節(jié)律紊亂對C57BL/6小鼠T細胞功能的影響,同時應用HBV高壓水注射小鼠模型,研究晝夜節(jié)律紊亂對HBV清除的影響。材料和方法1.購買5周齡的雄性C57BL/6小鼠適應環(huán)境1周后,隨機分為4組,包括晝夜節(jié)律提前組(Advanced circadian rhythm,ACR)、晝夜節(jié)律延遲組(Delayed circadian rhythm,DCR)、晝夜節(jié)律顛倒組(Reversed circadian rhythm,RCR)和正常晝夜節(jié)律組(Normal circadian rhythm,NCR),分別按不同方案進行晝夜明暗交替時間的調(diào)整或維持正常的晝夜明暗交替時間。2.按上述不同晝夜明暗交替時間處理2周后,每組處死4只小鼠,分離肝脾淋巴細胞,并通過流式細胞術(shù)檢測相關(guān)免疫細胞頻率。3.按上述不同晝夜明暗交替時間處理2周后,通過高壓尾靜脈注射pAAV/HBV1.2質(zhì)粒。在不同時間點通過小鼠內(nèi)眥靜脈采血,監(jiān)測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb的動態(tài)變化。4.通過FlowJo 10軟件分析流式檢測結(jié)果,SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學分析,Graphpad prism 7軟件進行圖表制作。結(jié)果1.與正常晝夜節(jié)律組小鼠相比,晝夜節(jié)律提前組、晝夜節(jié)律延遲組和晝夜節(jié)律顛倒組C57BL/6小鼠肝脾內(nèi)CD4~+T細胞、脾內(nèi)CD8~+T細胞、肝脾內(nèi)CD4~+CD44~+CD62L~-T細胞頻率降低,肝內(nèi)CD8~+T細胞頻率升高。2.與正常晝夜節(jié)律組小鼠相比,晝夜節(jié)律提前組、延遲組和顛倒組小鼠肝脾內(nèi)的CD4~+TNF-α~+T細胞和CD8~+TNF-α~+T細胞的頻率升高;晝夜節(jié)律提前組和延遲組肝內(nèi)CD8~+IFN-γ~+T細胞頻率升高;晝夜節(jié)律提前組、延遲組和顛倒組C57BL/6小鼠肝內(nèi)CD4~+Eomes~+T細胞及CD8~+Eomes~+T細胞頻率、CD4~+Tbet~+T細胞及CD8~+Tbet~+T細胞頻率均增加。3.與正常晝夜節(jié)律組小鼠相比,晝夜節(jié)律提前組小鼠肝內(nèi)CD4~+CD107a~+T細胞和CD8~+CD107a~+T細胞頻率增加,而晝夜節(jié)律延遲組和顛倒組肝內(nèi)CD4~+CD107a~+T細胞和CD8~+CD107a~+T細胞頻率下降。而脾內(nèi)CD4~+CD107a~+T細胞和CD8~+CD107a~+T細胞的頻率在晝夜節(jié)律提前組、延遲組和顛倒組均降低。4.與正常晝夜節(jié)律組小鼠相比,晝夜節(jié)律提前組、延遲組和顛倒組小鼠HBsAg和HBeAg的清除減慢,其HBsAb的產(chǎn)生也相應延遲;而HBeAb和HBcAb的水平則不受明顯影響。結(jié)論1.無論是晝夜節(jié)律的提前、延遲和顛倒,均降低了小鼠肝脾內(nèi)的CD4~+T細胞、脾內(nèi)CD8~+T細胞和肝脾內(nèi)CD4~+CD44~+CD62L~-T細胞頻率,雖然其肝內(nèi)表達TNF-α、INF-γ、Eomes、Tbet等促炎性細胞因子的T細胞增多,但肝內(nèi)和脾內(nèi)CD4~+CD107a~+T細胞和CD8~+CD107a~+T細胞頻率則下降,提示晝夜節(jié)律的紊亂對小鼠T細胞的頻率和功能均產(chǎn)生明顯影響。2.無論是晝夜節(jié)律的提前、延遲和顛倒,均延遲了HBV高壓水注射小鼠模型HBV的清除。晝夜節(jié)律紊亂導致T細胞功能變化可能參與了HBV清除的延遲,但其具體機制還有待進一步研究。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

圖 1.晝夜節(jié)律紊亂對小鼠 CD4+T 細胞頻率的影響（A.肝內(nèi) CD4+T 細胞頻率；B. 脾內(nèi) CD4+T 細胞頻率）晝夜節(jié)律的提前、延遲和顛倒均增加了小鼠肝內(nèi) CD8+T 細胞頻率，其中延遲組及顛倒組的細胞頻率顯著高于正常節(jié)律組（圖 2A）。此外 3 種晝夜節(jié)律紊亂均降低了脾內(nèi) CD8+T 細胞頻率，但和正常節(jié)律組間的差異無顯著性（圖 2B）。+++

圖 1.晝夜節(jié)律紊亂對小鼠 CD4+T 細胞頻率的影響（A.肝內(nèi) CD4+T 細胞頻率；B. 脾內(nèi) CD4+T 細胞頻率）晝夜節(jié)律的提前、延遲和顛倒均增加了小鼠肝內(nèi) CD8+T 細胞頻率，其中延遲組及顛倒組的細胞頻率顯著高于正常節(jié)律組（圖 2A）。此外 3 種晝夜節(jié)律紊亂均降低了脾內(nèi) CD8+T 細胞頻率，但和正常節(jié)律組間的差異無顯著性（圖 2B）。

圖 3.晝夜節(jié)律紊亂對小鼠 CD4+CD44+CD62L-T 細胞頻率的影響（A.肝內(nèi) CD4+CD44+CD62L-T 細胞頻率；B. 脾內(nèi) CD4+CD44+CD62L-T 細胞頻率）3.1.3 晝夜節(jié)律紊亂對小鼠 T 細胞促炎細胞因子表達的影響。細胞因子在炎癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮重要作用，可分為促炎細胞因子和抗炎細胞因子，TNF-α、IFN-γ、Eomes、Tbet 等均屬于促炎細胞因子。TNF-α 是由單核巨噬細胞和 T 細胞激活后產(chǎn)生的促炎細胞因子, 在炎癥反應時起到始動和核心作用。本研究中晝夜節(jié)律的提前、延遲和顛倒均增加了小鼠肝內(nèi)CD4+TNF-α+T 細胞頻率，其中晝夜節(jié)律提前組與正常節(jié)律組相比有顯著差異（圖 4A）。上述 3 種晝夜節(jié)律的調(diào)整還增加了脾內(nèi) CD4+TNF-α+T 細胞頻率，但和正常節(jié)律組間的差異均無顯著性（圖 4B）。不僅如此，3 種晝夜節(jié)律的調(diào)整還增加了小鼠肝內(nèi)及脾內(nèi)的 CD8+TNF-α+T 細胞頻率，但均只有晝夜節(jié)律提前組和正常節(jié)律組相比有顯著差異（圖 4C、4D）。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張亞男;孫晴晴;林衛(wèi)紅;魏春會;王傳蕾;王贊;;癲癇與晝夜節(jié)律[J];癲癇雜志;2019年01期

2 付聰;于歡;陳云飛;;晝夜節(jié)律系統(tǒng)與成人晝夜節(jié)律睡眠覺醒障礙[J];生理科學進展;2019年01期

3 ;晝夜節(jié)律[J];中國戰(zhàn)略新興產(chǎn)業(yè);2017年41期

4 趙今;原媛;張蕊;王昌圖;王麗;王曉暉;;D-Ser2-Oxyntomodulin改善Aβ31-35所致小鼠晝夜節(jié)律紊亂[J];神經(jīng)解剖學雜志;2018年03期

5 ;首次發(fā)現(xiàn)腸道微生物運動或會影響宿主的晝夜節(jié)律[J];生物醫(yī)學工程與臨床;2017年01期

6 胡思帆;劉媛;孫洪強;;老年人晝夜節(jié)律失調(diào)性睡眠-覺醒障礙研究進展[J];世界睡眠醫(yī)學雜志;2017年01期

7 卡洛斯·伊巴涅斯;梁炳鑫;;發(fā)現(xiàn)控制晝夜節(jié)律的分子機制的科學背景[J];飛碟探索;2017年11期

8 權(quán)澎琪;徐艷彩;高靈旺;李定旭;;桃小食心蟲羽化產(chǎn)卵及孵化的晝夜節(jié)律[J];華中昆蟲研究;2016年00期

9 樂凡;葉勝龍;;晝夜節(jié)律鐘基因與腫瘤[J];中國腫瘤生物治療雜志;2007年01期

10 魏建國,楊巧芳;急性心肌梗塞疼痛發(fā)作時間的晝夜節(jié)律[J];護士進修雜志;2000年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張自云;金成吉;;基于知識圖譜的國內(nèi)外晝夜節(jié)律研究進展可視化分析[A];2019中國生理學會運動生理學專業(yè)委員會會議暨“運動與慢性病防控”學術(shù)研討會論文集[C];2019年

2 王贊;張亞男;孫晴晴;于潔洋;湯琪;;癲癇與晝夜節(jié)律[A];中國睡眠研究會第十一屆全國學術(shù)年會論文匯編[C];2019年

3 鄧麗影;;晝夜節(jié)律失調(diào)性睡眠-覺醒障礙的診斷與處理[A];華東六省一市第二十三次神經(jīng)病學學術(shù)會議暨2016年浙江省神經(jīng)病學學術(shù)年會論文匯編[C];2016年

4 簡坤林;吳小峰;葉建威;馮光興;朱銀華;劉莉;;坑道作業(yè)人員免疫系統(tǒng)晝夜節(jié)律及調(diào)整的研究[A];2015年中國中西醫(yī)結(jié)合學會時間生物醫(yī)學專業(yè)委員會學術(shù)研討會暨換屆會議論文匯編[C];2015年

5 李建祥;;輻射對小鼠自發(fā)活動晝夜節(jié)律的影響[A];2011年全國時間生物醫(yī)學學術(shù)會議論文集[C];2011年

6 李瑩;鄭明銀;;數(shù)學建模在晝夜節(jié)律生物鐘中的應用[A];中國力學大會——2013論文摘要集[C];2013年

7 段長農(nóng);胡劍北;;胃腸道功能的晝夜節(jié)律研究[A];全國時間生物醫(yī)學學術(shù)座談會論文匯編[C];2001年

8 王濤;;晝夜節(jié)律與神經(jīng)變性病[A];第八屆中國睡眠醫(yī)學論壇暨中國睡眠研究會睡眠障礙專業(yè)委員會學術(shù)年會論文匯編[C];2019年

9 陳群;李占江;;精神障礙患者晝夜節(jié)律紊亂的研究新進展[A];中國睡眠研究會第十一屆全國學術(shù)年會論文匯編[C];2019年

10 高原;黃偉偉;王介鋒;王斐顥;唐吉友;;晝夜節(jié)律類型與腦血流及生理生化指標的相關(guān)性研究[A];中國睡眠研究會第十屆全國學術(shù)年會匯編[C];2018年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 北京大學深圳醫(yī)院 郭曉強;晝夜節(jié)律：生命體的內(nèi)在時鐘[N];中國社會科學報;2018年

2 記者 張夢然;大腦晝夜節(jié)律可在晨昏時增強視覺[N];科技日報;2018年

3 記者 卞晨光;2017年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎揭曉[N];光明日報;2017年

4 本報首席記者 許琦敏 唐聞佳;他們發(fā)現(xiàn)“生命時鐘”的奧秘[N];文匯報;2017年

5 李曉康;如果沒有光 人體的晝夜節(jié)律是25小時[N];中國醫(yī)藥報;2000年

6 蒲昭和;按人體節(jié)律給藥 提高治癌療效[N];中國醫(yī)藥報;2001年

7 魏開敏;按晝夜節(jié)律服用心血管藥物[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 馮衛(wèi)東;生物鐘與新陳代謝分子關(guān)聯(lián)查明[N];科技日報;2008年

9 本報記者 姜凝;誰“偷”走了我們的睡眠[N];天津日報;2018年

10 上海中醫(yī)藥大學附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院針灸治療失眠癥專病門診 付聰;慢聊失眠(二)[N];上海中醫(yī)藥報;2018年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 李光健;外側(cè)韁核在抑郁大鼠晝夜節(jié)律活動改變中的作用和可能機制[D];吉林大學;2016年

2 李姝婧;節(jié)律基因數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建及LBR調(diào)控晝夜節(jié)律的機理[D];華中科技大學;2017年

3 周先舉;果蠅群體嗅覺行為的晝夜節(jié)律以及阻斷嗅覺傳入和聽覺缺陷對果蠅活動晝夜節(jié)律的影響[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2005年

4 譚忠林;抑郁癥5-羥色胺系統(tǒng)及外周激素晝夜節(jié)律研究[D];中國科學技術(shù)大學;2007年

5 陶建英;晝夜節(jié)律對分娩啟動、胎兒生殖和心血管發(fā)育的影響[D];蘇州大學;2017年

6 孟德欣;韁核在視交叉上核—松果體晝夜節(jié)律控制系統(tǒng)中的作用研究[D];吉林大學;2009年

7 厲彩霞;晝夜節(jié)律對擇期手術(shù)患者術(shù)后感染的影響及機制[D];浙江大學;2017年

8 錢智勇;β腎上腺素能受體慢性激活對心臟外周生物鐘基因的調(diào)控[D];南京醫(yī)科大學;2016年

9 杜懿杰;若干同證疾�。ò榛虿话橐钟簦┎糠盅装Y及HPA軸相關(guān)指標的對照研究[D];復旦大學;2012年

10 潘恂;人工晝夜節(jié)律對鼠視網(wǎng)膜發(fā)育與生物鐘基因CRY1表達的影響及中醫(yī)陰陽鐘調(diào)整干預作用的研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2011年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 李娜;針刺對無晝夜節(jié)律C57BL/6J小鼠腎內(nèi)Clock、Bmal1基因表達的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2019年

2 李豪;電針對無晝夜節(jié)律小鼠腎內(nèi)Cry1和Cry2基因表達影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2019年

3 周凱麗;晝夜節(jié)律失調(diào)性睡眠-覺醒障礙伴抑郁焦慮患者經(jīng)顱磁刺激治療的神經(jīng)心理及睡眠微結(jié)構(gòu)變化的研究[D];天津醫(yī)科大學;2019年

4 潘炳燦;穹隆周區(qū)在小鼠運動和攝食中的作用及潛在機制研究[D];青島大學;2018年

5 萬林;嬰兒痙攣癥褪黑素及相關(guān)激素與晝夜節(jié)律因子表達水平的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2019年

6 艾靈;晝夜節(jié)律紊亂對小鼠T細胞功能和HBV清除的影響[D];華中科技大學;2019年

7 方巧梅;含時滯的哺乳動物晝夜節(jié)律模型的穩(wěn)定性及Hopf分岔分析[D];云南師范大學;2019年

8 李珂;室內(nèi)高溫對青年人生理晝夜節(jié)律的影響[D];華北電力大學;2019年

9 劉楊;魚油或藻油對NAFLD小鼠膽汁代謝的調(diào)節(jié)作用及晝夜節(jié)律探究[D];武漢輕工大學;2019年

10 桂黎鳳;ω-3 PUFA調(diào)節(jié)高脂小鼠腸道菌群晝夜節(jié)律的研究[D];武漢輕工大學;2019年

本文編號：2809438