發(fā)布時間：2020-11-15 20:54

　　 目的:探討長鏈非編碼RNA00238(long intergenic non-coding RNA00238,Linc00238)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期中的調(diào)控作用及可能的機制。方法:利用LincRNA芯片比較HBV陽性(HBV(+))與HBV陰性(HBV(-))肝組織樣本中LincRNA表達差異,根據(jù)芯片結果,最終選擇Linc00238為研究對象,real-time PCR驗證Linc00238表達;利用過表達及RNA干擾,檢測Linc00238對HBV復制、轉錄以及表達水平影響。利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測Linc00238對HBV啟動子活性的影響。結果:LincRNA芯片在HBV(+)組織中共發(fā)現(xiàn)13條LincRNA表達發(fā)生變化,其中2條上調(diào),11條下調(diào),real-time PCR進一步證實Linc00238在HBV(+)肝組織樣本中表達水平明顯降低,在HBV穩(wěn)定表達細胞系HepG2.2.15、HepAD38及HBV瞬時轉染細胞模型中同樣發(fā)現(xiàn)Linc00238表達下調(diào),提示HBV感染抑制Linc00238表達。過表達Linc00238,HBV復制及蛋白表達水平明顯減低,引入sh00238干擾Linc00238表達后,HBV復制及蛋白表達水平恢復(P0.05);雙熒光素酶報告系統(tǒng)顯示,HepG2細胞共轉染pHBs-luc、pHBx-luc、pHBc-luc及pCDNA-linc00238后的報告熒光與對照組無明顯差異(P0.05)。結論:通過體外研究發(fā)現(xiàn)Linc00238對HBV蛋白及DNA表達具有抑制作用,但研究進一步證實Linc00238不能通過影響HBV啟動子活性抑制HBV表達與復制。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

a：ELISA 檢測 HepAD38 細胞中轉染 pCDNA-linc00238 后 HBsAg 水平；b:ELISA 檢HepAD38 細胞中轉染 pCDNA-linc00238 后 HBeAg 水平；c：Western blot 檢測 HepAD3中轉染 pCDNA-linc00238 后 HBc 水平。圖 2-1 HepAD38 細胞過表達 Lnc00238 后 HBV 蛋白水平Figure2-1 HBV protein levels in HepAD38 cells up-regulated Linc002382.2 高表達 Linc00238 后抑制 HBV DNA 復制在 HepAD38 細胞中轉染 pCDNA-Linc00238，HBV DNA 復制水平較對照顯降低，HBV 復制中間體表達水平較對照組亦明顯降低（圖 2-2），結果證Linc00238 對 HBV DNA 復制具有抑制作用。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文2.3 干擾 Linc00238 作用后上調(diào) HBV 蛋白表達水平在 HepAD38 細胞中過分別表達 Linc00238+sh-NC、Linc00238+sh-00238、pCDNA-NC+sh-00238、pCDNA-NC+sh-NC，用 ELISA 檢測 HBs 及 HBe 表達，結果顯示，過表達 Linc00238 后 HBV 蛋白表達水平得到抑制，而當干擾外源性Linc00238 表達后，HBV 蛋白水平得到部分恢復，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05，圖 2-3）。結果進一步明確，Linc00238 對 HBV 生活周期具有抑制作用
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王艷巧;陳傳杰;張光文;;乙型肝炎病毒相關原發(fā)性肝癌的危險因素分析[J];肝臟;2019年10期

2 杜希芬;;電化學發(fā)光免疫分析技術在乙型肝炎病毒臨床檢驗中的應用效果[J];心理月刊;2019年13期

3 買木熱·肉孜;阿不來提·阿不都熱合木;;拉米夫定治療乙型肝炎病毒引起失代償肝病臨床分析[J];大家健康(學術版);2015年06期

4 刀琴;;不同乙肝治療方法對抗結核治療中的肝功保護作用[J];健康之路;2016年09期

5 戴娘欽;;siRNA對乙型肝炎病毒抵抗的研究進展[J];中國醫(yī)藥指南;2012年02期

6 魏茂周;鄭嶸;董安山;王華麗;;胸腺肽α1預防乙型肝炎病毒再激活臨床研究[J];中國當代醫(yī)藥;2012年07期

7 李鋼;胡明道;;乙型肝炎病毒X蛋白在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];醫(yī)學綜述;2012年11期

8 陳惠文;劉壬通;羅宜招;賀勇鋒;;乙型肝炎病毒外膜大蛋白檢測的臨床應用[J];中國醫(yī)藥指南;2010年22期

9 劉魚;王憬惺;李武平;黃毅;曾沛斌;何苗;;HIV感染獻血者中乙型肝炎病毒的感染特征研究[J];中國輸血雜志;2010年S1期

10 趙燕飛;姜新華;蘭天麗;;乙型肝炎病毒大蛋白檢測的臨床意義及應用價值[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2010年12期

相關博士學位論文 前10條

1 盛秋菊;乙型肝炎病毒母嬰傳播阻斷策略和病毒變異與阻斷失敗關系的研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

2 王亞琦;酒精性脂肪性肝病合并乙型肝炎病毒肝內(nèi)復制小鼠模型的建立及其對膽固醇代謝的影響研究[D];華中科技大學;2018年

3 李伯安;乙型肝炎病毒e抗原相互作用蛋白基因的克隆化及功能的初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

4 王玥;應用RNAi抑制乙型肝炎病毒復制和表達的研究[D];吉林大學;2004年

5 王迅;á干擾素誘導的細胞蛋白與乙型肝炎病毒相互作用關系的研究[D];復旦大學;2004年

6 劉曉紅;乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突變體對肝癌細胞生物學行為的影響及其機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

7 王剛;HBV感染HepG2細胞早期過程研究[D];山東大學;2005年

8 鄧春青;四個HBV感染相關候選基因的SNP關聯(lián)研究及初步功能鑒定[D];第三軍醫(yī)大學;2006年

9 楊桂濤;HLA-DRB1基因和慢性HBV感染相關性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2006年

10 任廣立;siRNA抑制乙型肝炎病毒的復制和表達的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 黃琴;Linc00238在乙型肝炎病毒復制中的調(diào)控作用[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

2 陳紅;乙型肝炎病毒X蛋白調(diào)控cGAS信號通路的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

3 楊軍;NOX2促進乙型肝炎病毒復制的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

4 王靜;鴨乙型肝炎病毒環(huán)介導等溫擴增檢測系統(tǒng)的建立及其基因組序列分析[D];南陽師范學院;2019年

5 沈志清;乙型肝炎病毒S蛋白對人APOAⅡ基因調(diào)控及機制[D];福建醫(yī)科大學;2018年

6 蔣佳宏;HBV整合調(diào)控肝癌細胞系HepG2.2.15凋亡及其機制的研究[D];浙江中醫(yī)藥大學;2019年

7 趙詠旺;原發(fā)性肝癌精確放療后乙型肝炎病毒（HBV）再激活分類預測[D];齊魯工業(yè)大學;2019年

8 李紅梅;α干擾素對HBV基因型Ⅰ抗病毒作用初步研究[D];昆明理工大學;2015年

9 熊智;Na~+-�；悄懰峁厕D運多肽的表達純化與行為表征的研究[D];哈爾濱工業(yè)大學;2018年

10 趙文昕;血液系統(tǒng)腫瘤患者乙型肝炎病毒（HBV）感染及其臨床結局分析[D];山東大學;2018年

本文編號：2885193