發(fā)布時間：2020-11-21 06:53

　　 研究目的1.了解廣東省H3N2亞型流感病毒的流行以及全基因組基因變異情況,并為廣東省流感病毒監(jiān)測防控提供參考意義,對H3N2的疫苗研制提供了理論依據(jù)。2.分析不同型別的禽流感病毒在活禽零售市場和批發(fā)市場市場的各類外環(huán)境標本和活禽肛咽拭子標本中的空間分布和時空分布,分析不同型別的禽流感病毒在各類標本中的污染情況。3.探究活禽市場從業(yè)人員針對不同型別的禽流感病毒的血清流行病學,了解不同型別的禽流感病毒在職業(yè)暴露人群中的感染情況。研究方法1.廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列研究采集2015年01月—2017年12月期間廣東省流感監(jiān)測哨點醫(yī)院流感患者鼻咽拭子標本,利用雞胚病毒分離法和MDCK細胞病毒分離法分離培養(yǎng)流感病毒。提取病毒核酸,檢測出甲型流感陽性標本后,對其進行進一步的H3亞型特異檢測。PCR法逆轉(zhuǎn)錄并擴增病毒,利用毛細管電泳法檢測擴增條帶,將得到目的條帶的擴增產(chǎn)物進行序列測定及分析。2.廣東省禽流感監(jiān)測和職業(yè)暴露人群血清學研究采集2017年02月至2019年02月期間6個地市禽流感監(jiān)測活禽市場外環(huán)境標本和活禽肛咽拭子標本,流感病毒雞胚分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)禽流感病毒。提取病毒核酸,檢測出甲型流感陽性標本后,進行H5、H7、H9亞型的特異性檢測。對流行病學概況資料和核酸檢測結(jié)果進行整理和分析;同時采集廣東省6個地市職業(yè)暴露人群血清標本并進行問卷調(diào)查,利用哈獸維科禽流感病毒H5、H7、H9亞型血凝抑制試驗抗原與陽性血清,對血清標本進行HA試驗和HI試驗。研究結(jié)果1.廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列中,2015—2017年12月分離株數(shù)目為17株,所占比重最高,其次為6月和7月。各地市間比較,清遠、河源、中山、深圳占比重較高;各年齡組間進行比較,童年(0-6歲)與少年(7-17歲)人數(shù)較多,遠高于其他組別;各性別組間比較,男性略高于女性。同時將60株分離株的HA、NA基因與2016—2018年和2015—2016年流感疫苗株的氨基酸位點相比發(fā)現(xiàn),前者增加了多個氨基酸位點突變。會導(dǎo)致病毒對神經(jīng)氨酸酶抑制劑的敏感性降低的NA氨基酸突變位點均未發(fā)生變異,提示2015年～2017年廣東省分離株未產(chǎn)生耐藥毒株,仍對奧司他韋等神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感。與底物直接作用的抗原決定簇位點和對酶起催化作用的位點都沒有發(fā)生位點突變,提示NA蛋白的酶活性中心保持高度的保守。2.廣東省禽流感監(jiān)測和職業(yè)暴露人群血清研究采集了2017年2月—2019年2月期間,陽江、廣州、茂名、梅州、潮州、佛山6個地市共17個活禽貿(mào)易零售市場和活禽貿(mào)易批發(fā)市場的禽類泄殖腔拭子和咽拭子、各類外環(huán)境拭子,共計14958份標本。A型禽流感病毒陽性率與H9亞型禽流感病毒陽性率較其他亞型高,且變化趨勢基本一致。6個地市之間的禽流感病毒陽性率有一定差異。各型別佛山的禽流感病毒陽性率均為最高�；钋菖�發(fā)市場A型、H5亞型、H7亞型、未分型禽流感病毒陽性率略高于活禽零售市場。活禽零售市場中佛山羅湖市場的A型禽流感病毒陽性率最高�；钋菖�發(fā)市場中佛山中南農(nóng)產(chǎn)品交易中心的A型H5亞型、H9亞型、未分型禽流感病毒陽性率最高;陽江三鳥批發(fā)市場的H7亞型禽流感病毒陽性率最高;茂名茂南區(qū)袂花市場的各類型別禽流感病毒陽性率最低。職業(yè)暴露人群血清標本采集于2017年—2018年4月和10月分別在選定的活禽市場收集從業(yè)人員血清樣本進行血清學調(diào)查,共采集547份血清標本,均為陰性。研究結(jié)論廣東省H3N2亞型流感病毒基因序列研究顯示H3N2亞型亞型流感呈雙峰流行特點且未成年人易感。廣東省2015優(yōu)勢流行株屬3c.2a分支和3c.3a分支,2016年和2017年的優(yōu)勢流行株均屬3c.2a分支,與我國整體優(yōu)勢進化分支情況相同。本研究發(fā)現(xiàn)2015—2017年間,我國甲型H3N2亞型流感病毒分離株間、分離株與疫苗株之間的同源性總體較高,但存在一定的差異且分支不夠明確。本研究所涉及的60株分離株與2015—2016年和2016—2018年疫苗株相比,HA1區(qū)氨基酸位點變異數(shù)目分別為38和40,變異率分別為為11.55%和12.15%,共涉及A～E5個抗原表位區(qū)域。特別是多株分離株發(fā)生N121K和R142G/K位點突變,均屬區(qū)域的關(guān)鍵氨基酸位點,表明H3N2亞型流感病毒有持續(xù)突變的趨勢,與早期報道一致。與兒童高病死率相關(guān)的HA基因T128A位點,本研究表示未發(fā)生變異。因此,我們要密切關(guān)注H3N2亞型流感的關(guān)鍵氨基酸位點變異情況。H3N2亞型流感病毒在最近幾年的致病性較其他亞型的流感要低,但其仍然具有引起高致病性大規(guī)模流行的可能。我們應(yīng)加強和完善流感的預(yù)測系統(tǒng),及時比對和分析病毒基因序列,掌握廣東省A(H3N2)流感病毒的抗原性和基因特性變異情況,從而為研制疫苗提供重要的依據(jù),及時防控流感病毒的傳播與流行。廣東省禽流感監(jiān)測分析表明廣東省活禽市場外環(huán)境中禽流感病毒污染情況不容樂觀,且污染情況主要發(fā)生在流通環(huán)節(jié);不同型別的禽流感病毒的分布具有季節(jié)性差異,甲型、H5、H7、H9及除H5/H7/H9亞型以外的其他亞型檢出陽性率在冬春季較高。6個地市之間的禽流感病毒陽性率有一定差異,其中各型別佛山的禽流感病毒陽性率均為最高。自2017年秋季起,H7N9亞型禽流感病毒免疫工作的開展,可能是H7亞型禽流感病毒陽性檢出率持續(xù)極低的最主要原因。絕大多數(shù)類型外環(huán)境標本和禽類肛咽拭子均檢出禽流感病毒,A型禽流感病毒陽性檢出率較高的有鴿籠擦拭標本、鵪鶉肛咽拭子、秤盤表面涂抹標本、運輸車、地板擦拭標本、鴨肛咽拭子等,表明在禽類稱重、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)易造成污染,主要原因可能和不同類型外環(huán)境標本受禽類檢查污染的嚴重程度不同有關(guān)。此次血清學調(diào)查中,針對H5、H7、H9亞型的HI試驗結(jié)果結(jié)果均為陰性,提示無隱性感染者。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R511.7;R181.3
【部分圖文】：

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本文編號：2892700