HIV-1感染者血漿外泌體對T細胞功能的調(diào)節(jié)作用及與CD4/CD8比值異常的關(guān)系
發(fā)布時間：2020-12-11 07:58
背景:接受長期有效cART后,HIV患者的CD4+T細胞數(shù)量可以恢復到350個/uL以上,CD4/CD8比值恢復正常。仍有部分CD4/CD8比值異常的患者,體內(nèi)CD8+T細胞顯示出更高的活化和衰老水平。本研究旨在探討在接受長期有效ART治療的HIV-1感染者血漿中血漿外泌體的動態(tài)變化、與患者CD4/CD8比值的相關(guān)性及其對T細胞功能的免疫調(diào)節(jié)作用。方法:本研究入組慢性HIV-1感染者21例,患者均為cART治療后完全應(yīng)答患者（Complete Responders,CRs）（接受cART治療2年以上,病毒載量持續(xù)2年以上低于20拷貝/mL,現(xiàn)階段CD4+T細胞計數(shù)>350個/uL）,根據(jù)患者CD4/CD8比值分為異常組和復常組,異常組（CD4/CD8<0.8）患者11例,復常組（CD4/CD8>0.8）患者10例;入組5例健康人作為對照（hea Ithy control,HC）。（1）比較三組人群中血漿外泌體的濃度變化,并分析其與CD4/CD8比值的相關(guān)性。（2）將患者的血漿外泌體與單一健康人的新鮮PBMC進行共培養(yǎng),觀察不同組別來源外泌體對CD8+T細胞分泌細胞因子...
【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學院北京市
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１血漿外泌體的鑒定??Ａ．血漿外泌體電鏡下形態(tài)；Ｂ．血漿外泌體的粒徑分布；Ｃ．血漿外泌體的ＷＢ鑒定，利用??Ｊｕｒｋａｔ細胞裂解所得蛋白作為對照
我們將ＣＤ４／ＣＤ８異常患者血漿與健康人ＰＢＭＣ在體外環(huán)境中共同培養(yǎng)，加入ＣＤ３??抗體和ＣＤ２８抗體進行活化刺激孵育４８小時，通過檢測ＣＤ８＋Ｔ細胞上的ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ??的表達，以明確ＣＤ４／ＣＤ８異�；颊哐獫{外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞活化水平的影響。如圖３．?Ａ??所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ８＋Ｔ細胞表面ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ的共??表達水平明顯低于ＣＤ４／ＣＤ８復�；颊撸ǎ�?＝?０．００８）和ＨＣ對照組（Ｐ?＝?０．００１）。相關(guān)性??分析進一步顯示，ＣＤ８＋Ｔ細胞的活化水平與患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相關(guān)（ｒ?＝?０．４７８，?Ｐ??＝０．０３９），與患者ＣＤ８計數(shù)水平呈負相關(guān)（ｒ?＝?－０．４７９，Ｐ?＝?０．０３８），與ＣＤ４計數(shù)水??平未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??２．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌細胞因子的影響??我們觀察了患者血漿外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌細胞因子水平的影響，將患者血漿??與單一健康人ＰＢＭＣ在體外環(huán)境中共同培養(yǎng)，加入ＣＤ３抗體和ＣＤ２８抗體活化刺激孵育??４８小時，收獲細胞前加入ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ，檢測ＣＤ８＋Ｔ細胞內(nèi)的ＩＦＮ－?ｙ、ＴＮＦ－?ａ和ＩＬ－２??水平。結(jié)果如圖４所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌??ＩＦＮ－ｙ的能力弱于復常組（Ｐ?＝?〇．〇１２）和對照組（Ｐ〈?〇．〇〇１）
同組患者的外泌體會對其中的ＣＤ４＋Ｔ功能的影響。??１．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ４＋Ｔ細胞活化水平的影響??如圖６所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ４＋Ｔ細胞表面??ＣＤ３８ＨＬＡ－ＤＲ＋的共表達水平明顯低于復常組（Ｐ?＝?０．００８）和對照組（Ｐ?＝?０．００１）。相關(guān)??性分析進一步顯示，ＣＤ４＋Ｔ細胞的活化與患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相關(guān)（ｒ?＝?０．?５０７，?Ｐ?＝??０．?０２７），與患者ＣＤ８細胞計數(shù)呈負相關(guān)（ｒ?＝?－０．?５３１，Ｐ?＝?０．?０１９），與ＣＤ４細胞計數(shù)之??間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??２．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌細胞因子的影響??如圖７所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌ＩＬ－２的能??力弱于復常組（Ｐ?＜?〇．?〇〇１）和ＨＣ對照組（Ｐ?＝?０．?００３），著提示ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌ＩＬ－２的??水平也會受到ＣＤ４／ＣＤ８異�；颊叩难獫{外泌體的抑制性調(diào)節(jié)，且ＩＬ－２的分泌水平與??患者ＣＤ４／ＣＤ８比值之間有顯著相關(guān)性（ｒ?＝?０．７７８，Ｐ〈?０．００１），與患者ＣＤ８細胞計數(shù)??間也存在顯著相關(guān)性（ｒ?＝?－０．７３８，?Ｐ〈?０．００１），與ＣＤ４細胞計數(shù)之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??另外
本文編號：2910167
【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學院北京市
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１血漿外泌體的鑒定??Ａ．血漿外泌體電鏡下形態(tài)；Ｂ．血漿外泌體的粒徑分布；Ｃ．血漿外泌體的ＷＢ鑒定，利用??Ｊｕｒｋａｔ細胞裂解所得蛋白作為對照
我們將ＣＤ４／ＣＤ８異常患者血漿與健康人ＰＢＭＣ在體外環(huán)境中共同培養(yǎng)，加入ＣＤ３??抗體和ＣＤ２８抗體進行活化刺激孵育４８小時，通過檢測ＣＤ８＋Ｔ細胞上的ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ??的表達，以明確ＣＤ４／ＣＤ８異�；颊哐獫{外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞活化水平的影響。如圖３．?Ａ??所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ８＋Ｔ細胞表面ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ的共??表達水平明顯低于ＣＤ４／ＣＤ８復�；颊撸ǎ�?＝?０．００８）和ＨＣ對照組（Ｐ?＝?０．００１）。相關(guān)性??分析進一步顯示，ＣＤ８＋Ｔ細胞的活化水平與患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相關(guān)（ｒ?＝?０．４７８，?Ｐ??＝０．０３９），與患者ＣＤ８計數(shù)水平呈負相關(guān)（ｒ?＝?－０．４７９，Ｐ?＝?０．０３８），與ＣＤ４計數(shù)水??平未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??２．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌細胞因子的影響??我們觀察了患者血漿外泌體對ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌細胞因子水平的影響，將患者血漿??與單一健康人ＰＢＭＣ在體外環(huán)境中共同培養(yǎng)，加入ＣＤ３抗體和ＣＤ２８抗體活化刺激孵育??４８小時，收獲細胞前加入ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ，檢測ＣＤ８＋Ｔ細胞內(nèi)的ＩＦＮ－?ｙ、ＴＮＦ－?ａ和ＩＬ－２??水平。結(jié)果如圖４所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ８＋Ｔ細胞分泌??ＩＦＮ－ｙ的能力弱于復常組（Ｐ?＝?〇．〇１２）和對照組（Ｐ〈?〇．〇〇１）
同組患者的外泌體會對其中的ＣＤ４＋Ｔ功能的影響。??１．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ４＋Ｔ細胞活化水平的影響??如圖６所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ４＋Ｔ細胞表面??ＣＤ３８ＨＬＡ－ＤＲ＋的共表達水平明顯低于復常組（Ｐ?＝?０．００８）和對照組（Ｐ?＝?０．００１）。相關(guān)??性分析進一步顯示，ＣＤ４＋Ｔ細胞的活化與患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相關(guān)（ｒ?＝?０．?５０７，?Ｐ?＝??０．?０２７），與患者ＣＤ８細胞計數(shù)呈負相關(guān)（ｒ?＝?－０．?５３１，Ｐ?＝?０．?０１９），與ＣＤ４細胞計數(shù)之??間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??２．?ＣＲ患者血漿外泌體對ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌細胞因子的影響??如圖７所示，ＣＤ４／ＣＤ８異常組患者的血漿外泌體處理的ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌ＩＬ－２的能??力弱于復常組（Ｐ?＜?〇．?〇〇１）和ＨＣ對照組（Ｐ?＝?０．?００３），著提示ＣＤ４＋Ｔ細胞分泌ＩＬ－２的??水平也會受到ＣＤ４／ＣＤ８異�；颊叩难獫{外泌體的抑制性調(diào)節(jié)，且ＩＬ－２的分泌水平與??患者ＣＤ４／ＣＤ８比值之間有顯著相關(guān)性（ｒ?＝?０．７７８，Ｐ〈?０．００１），與患者ＣＤ８細胞計數(shù)??間也存在顯著相關(guān)性（ｒ?＝?－０．７３８，?Ｐ〈?０．００１），與ＣＤ４細胞計數(shù)之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。??另外
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