豬附紅細(xì)胞體病是由豬附紅細(xì)胞體(M.suis)引起的人畜共患傳染病,具有宿主專(zhuān)一性特點(diǎn),常引起機(jī)體發(fā)熱、貧血、黃疸等癥狀,給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的隱患與危害。該病病原感染極具普遍性,且為隱性感染,臨床癥狀與豬的許多其他疾病相似,在診斷上易誤診、漏診,因此,對(duì)M.suis病的診斷是防控M.suis的關(guān)鍵。但是,目前仍缺少基層獸醫(yī)人員操作方便且適用于大批量檢測(cè)和普查的檢測(cè)方法。ELISA檢測(cè)方法和膠體金免疫層析技術(shù)方法憑借簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定性、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),成為目前用于動(dòng)物疫病檢測(cè)的主要方法,且膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)豬M.suis抗體的檢測(cè)國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。本研究?jī)?yōu)化了IHA檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體抗體的方法,建立了M.suis間接ELISA和膠體金免疫層析方法。并對(duì)這三種方法進(jìn)行比較,尋求最佳檢測(cè)方法。 本研究分為四個(gè)部分,1、將豬附紅細(xì)胞體免疫小豬制備陽(yáng)性血清,IHA效價(jià)達(dá)到1：512。2、優(yōu)化IHA試驗(yàn)方法,確定豬附紅細(xì)胞體濃度2mg/mL,37℃致敏紅細(xì)胞45min,同時(shí)對(duì)402份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)。3、本研究建立了豬附紅細(xì)胞體抗體間接ELISA檢測(cè)方法。確定了最佳條件為抗原80μg每孔,4℃包...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1 豬附紅細(xì)胞體生物學(xué)特性
    2 豬附紅細(xì)胞體致病機(jī)理
    3 豬附紅細(xì)胞體病的流行情況
    4 豬附紅細(xì)胞體病免疫學(xué)研究
    5 豬附紅細(xì)胞體病診斷方法的研究現(xiàn)狀
        5.1 臨床診斷
        5.2 血清學(xué)診斷
        5.3 分子生物學(xué)診斷
    6 膠體金免疫層析技術(shù)的研究進(jìn)展
        6.1 膠體金免疫層析技術(shù)概況
        6.2 膠體金技術(shù)原理
        6.3 膠體金層析免疫技術(shù)方法的應(yīng)用
    7 研究的目的及意義
第二章 間接ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用
    1 試劑和材料
        1.1 試劑
        1.2 材料
        1.3 試驗(yàn)儀器
        1.4 主要試劑的配置
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 豬陽(yáng)性血清的制備
        2.2 IHA條件的優(yōu)化
        2.3 間接ELISA方法的建立
        2.4 間接ELISA與IHA方法比較
    3 結(jié)果
        3.1 陽(yáng)性血清制備
        3.2 IHA試驗(yàn)條件優(yōu)化
        3.3 間接ELISA的建立
        3.4 ELISA與IHA試驗(yàn)結(jié)果的比較
    4 討論
第三章 豬附紅細(xì)胞體膠體金檢測(cè)方法的研究
    1 材料及方法
        1.1 試劑與材料
        1.2 試驗(yàn)儀器
        1.3 主要試劑的配置
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 膠體金制備及質(zhì)量鑒定
        2.2 金標(biāo)蛋白的制備
        2.3 金標(biāo)復(fù)合物的鑒定
        2.4 免疫層析試紙條條件的優(yōu)化
        2.5 免疫層析試紙條組裝
        2.6 免疫層析試紙條質(zhì)量評(píng)價(jià)
    3 結(jié)果
        3.1 膠體金的制備
        3.2 金標(biāo)蛋白的制備
        3.3 重懸液的選擇
        3.4 離心速度的選擇
        3.5 NC膜的封閉劑與封閉時(shí)間的選擇
        3.6 金標(biāo)墊的預(yù)處理
        3.7 質(zhì)控線與檢測(cè)線最佳濃度包被選擇
        3.8 免疫層析試紙條組裝
        3.9 免疫層析試紙條質(zhì)量評(píng)價(jià)
    4 臨床樣品的檢測(cè)
    5 討論
結(jié)論與展望
    1 結(jié)論
        1.1 豬附紅細(xì)胞體陽(yáng)性血清的制備
        1.2 IHA試驗(yàn)條件的優(yōu)化
        1.3 豬附紅細(xì)胞體病ELISA方法的建立
        1.4 豬附紅細(xì)胞體病膠體金免疫層析方法的建立
    2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4056092