為研究絲氨酸蛋白酶23（PRSS23）在蛋雞卵泡中的表達(dá)部位及其mRNA在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)與孕激素（P₄）分泌的關(guān)系,選取直徑為3～5 mm的大白卵泡（LWF）和直徑為6～8 mm的小黃卵泡（SYF）,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)PRSS23進(jìn)行組織定位;分別選取小白卵泡（SWF）、LWF、SYF、大黃卵泡（LYF）,用1 mL注射器抽取卵泡液,測(cè)定不同大小等級(jí)前卵泡卵泡液中P₄的含量;刮取位于卵泡內(nèi)膜上的顆粒細(xì)胞,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)PRSS23基因mRNA在蛋雞不同大小等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,PRSS23在蛋雞卵泡顆粒細(xì)胞層、膜細(xì)胞層和卵丘細(xì)胞均有表達(dá),在SYF顆粒細(xì)胞層表達(dá)量最高;PRSS23基因mRNA在SYF中的含量顯著高于其他卵泡（P<0.05）;P₄在SYF卵泡液中的含量顯著高于其他卵泡卵泡液（P<0.05）。以上結(jié)果表明,PRSS23在SYF中可能會(huì)通過(guò)促進(jìn)顆粒細(xì)胞分泌P₄來(lái)影響卵泡的選擇。

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圖1 PRSS23在蛋雞卵泡中的表達(dá)(200×)

通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)PRSS23在蛋雞卵泡中的表達(dá)進(jìn)行定位,結(jié)果表明,PRSS23在蛋雞卵泡顆粒細(xì)胞層、膜細(xì)胞層和卵丘細(xì)胞均有表達(dá),且在SYF顆粒細(xì)胞層表達(dá)量最高(圖1)。2.2PRSS23基因mRNA在蛋雞不同大小卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)差異分析

圖2 等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞內(nèi)PRSS23基因的相對(duì)表達(dá)水平

通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品的含量對(duì)應(yīng)的OD450來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=3.7x2+10.0x+6.8,R2為0.9893(圖3)。從圖4可以看出,P4在SYF卵泡液中的含量顯著高于其他卵泡卵泡液(P<0.05),而在SWF、LWF、LYF卵泡液中的含量差異則不顯著(P>0.05)。....

圖3 P4含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞內(nèi)PRSS23基因的相對(duì)表達(dá)水平圖4等級(jí)前卵泡卵泡液中P4含量

圖4 等級(jí)前卵泡卵泡液中P4含量

圖3P4含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線3結(jié)論與討論

本文編號(hào)：4056197