目的牙齦卟啉單胞菌是牙周主要致病菌之一,膠原酶蛋白Prt C是其主要致病因子之一,本研究以Prt C蛋白為研究對(duì)象,探討來自兩個(gè)不同牙齦卟啉單胞菌菌株ATCC53977和ATCC33277的prt C基因能否在大腸桿菌體內(nèi)獲得可溶性表達(dá)、純化以及功能初探。材料與方法全基因合成牙齦卟啉單胞菌Porphyromonas gingivalis ATCC 53977和Porphyromonas gingivalis ATCC 33277中prt C基因,分別構(gòu)建重組表達(dá)載體p28-prt C和p29-prt C,生物信息學(xué)分析和低溫誘導(dǎo)表達(dá)、SDS-PAGE、Western blot鑒定、確定蛋白的聚集狀態(tài)、酶解法驗(yàn)證膠原酶的功能。結(jié)果通過表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)牙齦卟啉單胞菌ATCC 53977中的膠原酶蛋白Prt C未能在大腸桿菌體內(nèi)獲得可溶性表達(dá)。而牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277中的Prt C蛋白可以在大腸桿菌體內(nèi)獲得可溶性表達(dá),于是成功構(gòu)建了膠原酶蛋白Prt C原核表達(dá)載體,通過親和層析和分子篩層析純化出高純度且較穩(wěn)定的蛋白Prt C,并且交聯(lián)實(shí)驗(yàn)證明它在溶液中以多聚體的形式存在,采用蒸汽擴(kuò)散法...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-2PrtC蛋白序列比對(duì)

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文243結(jié)果3.1PrtC蛋白的生物信息學(xué)分析P.gingivalisATCC53977菌株中的PrtC蛋白由330個(gè)氨基酸組成，分子量為37.4kDa，利用ProtParamtool（https://web.expasy.org/protparam/）預(yù)測(cè)....

圖3-3prtC基因的PCR產(chǎn)物電泳Fig.3-3TheCloneofprtCgenefragment

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，載體線性化PCR產(chǎn)物經(jīng)核酸電泳結(jié)果如圖所示。將各自PCR產(chǎn)物回收后，使目的基因與載體之間發(fā)生同源重組，重組產(chǎn)物經(jīng)轉(zhuǎn)化，挑取單克隆并抽質(zhì)粒，送公司測(cè)序。....

圖3-3prtC基因的PCR產(chǎn)物電泳Fig.3-3TheCloneofprtCgenefragment

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，載體線性化PCR產(chǎn)物經(jīng)核酸電泳結(jié)果如圖所示。將各自PCR產(chǎn)物回收后，使目的基因與載體之間發(fā)生同源重組，重組產(chǎn)物經(jīng)轉(zhuǎn)化，挑取單克隆并抽質(zhì)粒，送公司測(cè)序。....

圖3-4菌液PCRFig.3-4TheelectrophoresisofPCRproductinbacterialfluid

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文25P.gingivalisATCC53977和P.gingivalisATCC33277目的基因PCR，載體線性化PCR產(chǎn)物經(jīng)核酸電泳結(jié)果如圖所示。將各自PCR產(chǎn)物回收后，使目的基因與載體之間發(fā)生同源重組，重組產(chǎn)物經(jīng)轉(zhuǎn)化，挑取單克隆并抽質(zhì)粒，送公司測(cè)序。....

本文編號(hào)：4051930