目的：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一類能夠從骨髓、脂肪、羊膜和牙髓等多種組織分離的干細(xì)胞。由于其具有多向分化潛能,不表達(dá)人白細(xì)胞抗原DR位點(diǎn)(Human leukocyte antigen-antigen D related, HLA-DR)、 CD45等細(xì)胞表面標(biāo)志的低免疫原性,以及向損傷組織、腫瘤部位歸巢和促進(jìn)組織再生的特性,以MSCs為主的干細(xì)胞治療有望成為腫瘤和一些自體免疫疾病的新型治療手段。目前已證明MSCs在體內(nèi)外能夠分泌細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信號(hào)通路,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。其中,NF-κB信號(hào)通路也參與了該過程,然而完整的抑制機(jī)制目前尚未見報(bào)道。起源于皮膚、黏膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的黑色素瘤中有50%的病例與BRAF基因突變有關(guān)。該基因突變的發(fā)生導(dǎo)致白介素-1(Interleukin-1, IL-1)持續(xù)激活NF-κB信號(hào)通路,使得黑色素瘤細(xì)胞細(xì)胞周期失控,進(jìn)而導(dǎo)致了腫瘤的形成和發(fā)展。有研究證明MSCs能夠分泌IL-1的受體拮抗劑(Interleukin-1 receptor antagonist, IL-1R...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 黑色素瘤
    1.2 MSCs
        1.2.1 MSCs概述
        1.2.2 MSCs對腫瘤細(xì)胞的直接抑制作用機(jī)制
            1.2.2.1 MSCs通過下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖
            1.2.2.2 MSCs通過下調(diào)Akt信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖
            1.2.2.3 MSCs通過分泌微泡抑制腫瘤細(xì)胞增殖
            1.2.2.4 MSCs抑制腫瘤細(xì)胞增殖的其他途徑
        1.2.3 MSCs抑制腫瘤細(xì)胞增殖的間接機(jī)制
            1.2.3.1 MSCs向腫瘤歸巢的機(jī)制
            1.2.3.2 MSCs免疫抑制的機(jī)制
            1.2.3.3 MSCs間接抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制
        1.2.4 MSCs是否抑制腫瘤細(xì)胞增殖的爭議
    1.3 NF-κB信號(hào)通路,IL-1與IL-1Ra
    1.4 總結(jié)
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基
    2.2 主要試劑和試劑盒
    2.3 質(zhì)粒和菌株
    2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.6 實(shí)驗(yàn)耗材
    2.7 主要溶液的配制
        2.7.1 核酸電泳緩沖液的配制
        2.7.2 蛋白質(zhì)電泳和Western Blot所用試劑的配制
        2.7.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)主要溶液配制
        2.7.4 其他實(shí)驗(yàn)溶液配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 MSCs、HEK-293細(xì)胞和A375細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.1.1 MSCs的復(fù)蘇
        3.1.2 MSCs的傳代
        3.1.3 MSCs的凍存
        3.1.4 A375細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞的復(fù)蘇
        3.1.5 A375細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞的傳代
        3.1.6 A375細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞的凍存
    3.2 MSCs對A375細(xì)胞增殖能力的影響
        3.2.1 MSCs與A375細(xì)胞共培養(yǎng)對A375的抑制效應(yīng)分析
        3.2.2 MSCs CM對A375細(xì)胞的抑制效應(yīng)分析
        3.2.3 MSCs CM對A375細(xì)胞周期的影響
        3.2.4 MSCs CM對NF-κB信號(hào)通路的影響
    3.3 沉默IL-1Ra表達(dá)的多克隆細(xì)胞MSCs-S和過表達(dá)IL-1Ra的多克隆細(xì)胞MSCs-O的獲得
        3.3.1 IL-1Ra和GAPDH的引物設(shè)計(jì)
        3.3.2 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        3.3.3 重組載體pcDNA3.1-EGFP-IL-1Ra和pGPH1-IL-1Ra的構(gòu)建
        3.3.4 MSCs-S和MSCs-O的獲得
        3.3.5 IL-1Ra在MSCs、MSCs-O和MSCs-S中的表達(dá)水平的檢測
    3.4 MSCs-S CM和MSCs-O CM對A375細(xì)胞增殖能力的影響
        3.4.1 MSCs-S CM對A375細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)分析
        3.4.2 MSCs-S CM對A375細(xì)胞周期的影響
        3.4.3 MSCs-O CM對A375細(xì)胞的抑制效應(yīng)分析
        3.4.4 MSCs-O CM對A375細(xì)胞周期的影響
    3.5 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細(xì)胞抑制效應(yīng)的分析及對NF-κB信號(hào)通路的影響
        3.5.1 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細(xì)胞抑制效應(yīng)的分析
        3.5.2 MSCs-S和MSCs-O CM對NF-κB信號(hào)通路的影響
    3.6 裸鼠異位瘤實(shí)驗(yàn)
        3.6.1 A375細(xì)胞裸鼠異位瘤模型的建立
        3.6.2 腫瘤的組織學(xué)檢測
4 結(jié)果
    4.1 MSCs對A375細(xì)胞增殖的抑制作用
        4.1.1 MSCs與A375細(xì)胞共培養(yǎng)對A375細(xì)胞的抑制效應(yīng)分析
        4.1.2 MSCs CM對A375細(xì)胞的抑制效應(yīng)分析
        4.1.3 MSCs CM對A375細(xì)胞周期的影響
        4.1.4 MSCs CM對NF-κB信號(hào)通路的影響
    4.2 MSCs對A375細(xì)胞增殖的抑制作用的機(jī)制
        4.2.1 MSCs中IL-1Ra表達(dá)水平的調(diào)節(jié)
        4.2.2 降低IL-1Ra表達(dá)水平減弱了MSCs對A375細(xì)胞增殖的抑制作用
        4.2.3 提高IL-1Ra表達(dá)水平增強(qiáng)了MSCs對A375細(xì)胞增殖的抑制作用
        4.2.4 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細(xì)胞周期的影響
        4.2.5 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細(xì)胞抑制效應(yīng)的分析及對NF-κB信號(hào)通路的影響
    4.3 IL-1Ra表達(dá)水平對A375細(xì)胞體內(nèi)增殖的影響
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 英文縮略詞表
作者簡歷
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號(hào)：4049153