研究背景 芫花酯甲由瑞香科植物芫花中提取所得，可以抑制P-388，L1210，KB等多種細(xì)胞的增殖，抑制DNA，RNA和蛋白的合成，對拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的活性具有顯著的抑制作用，而對腫瘤壞死因子TNF-α，白細(xì)胞介素IL-1α和IL-1β的生物合成則并無顯著影響。動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，芫花酯甲可抑制C57BL／6和BDF₁小鼠Lewis肺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。 盡管許多研究證實(shí)芫花酯甲可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖以及腫瘤的生長，但是其具體的作用途徑目前尚未闡明。為此，我們檢測了芫花酯甲對黑色素瘤A375細(xì)胞增殖的影響，肯定了其對黑色素瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，并從細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及對蛋白激酶C（PKC）活化作用三個(gè)方面解釋了其可能的作用機(jī)理，并在小鼠黑色素瘤模型上驗(yàn)證了芫花酯甲的抗腫瘤活性，為今后研究芫花酯甲的作用機(jī)理及將其開發(fā)成為新的抗癌藥物打下基礎(chǔ)。 研究方法 我們采用臺盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)和CCK-8分析法來檢測芫花酯甲對細(xì)胞存活率的影響。通過[³H]-胸腺嘧啶摻入實(shí)驗(yàn)分析其對細(xì)胞DNA合成的影響。另外，對細(xì)胞進(jìn)行碘化丙啶染色，...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
英文所略表
前言
試驗(yàn)材料
    1.細(xì)胞系及菌株
    2.細(xì)胞培養(yǎng)材料
    3.藥品及主要生化試劑
    4.抗體
    5.試劑盒
    6.質(zhì)粒
    7.動物
    8.主要儀器
    9.溶液的配制
實(shí)驗(yàn)方法
    1.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
    2.細(xì)胞凍存
    3.生長抑制實(shí)驗(yàn)
    4.CCK-8法檢測芫花酯甲對細(xì)胞活力的影響
    5.³H-TdR摻入法檢測芫花酯甲對細(xì)胞DNA合成的影響
    6.碘化丙啶染色流式細(xì)胞術(shù)檢測芫花酯甲對細(xì)胞周期分布的影響
    7.流式細(xì)胞術(shù)測定芫花酯甲對細(xì)胞線粒體膜電勢的影響
    8.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測芫花酯甲對A375細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用
    9.Bradford法測定蛋白濃度
    10.電泳及相關(guān)染色
    11.Western Blot測定細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)變化情況
    12.芫花酯甲對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    13.PKC的提取純化以及活性測定
    14.質(zhì)粒的提取、純化及轉(zhuǎn)染
    15.芫花酯甲對于PKCγ的直接激活作用
    16.建立小鼠黑色素瘤模型測定芫花酯甲對腫瘤生長的抑制作用
    17.芫花酯甲對黑色素瘤轉(zhuǎn)移性的影響實(shí)驗(yàn)
    18.數(shù)據(jù)的處理
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.芫花酯甲抑制A375人黑色素瘤細(xì)胞增殖
    2.芫花酯甲對A375細(xì)胞活力的影響
    3.芫花酯甲對A375細(xì)胞DNA合成的影響
    4.芫花酯甲對A375細(xì)胞周期分布的影響
    5.Western blot檢測芫花酯甲對A375細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)的影響
    6.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測細(xì)胞凋亡
    7.芫花酯甲對A375細(xì)胞線粒體膜電勢的影響
    8.Western blot檢測芫花酯甲對凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    9.芫花酯甲急性給藥對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    10.芫花酯甲長期給藥對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    11.芫花酯甲急性給藥對細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶C活性的影響
    12.芫花酯甲對鼠腦PKC粗提物的活性影響
    13.芫花酯甲對純化后的鼠腦PKC活性之影響
    14.芫花酯甲對γ-PKC的激活作用
    15.芫花酯甲對體內(nèi)黑色素瘤的生長抑制作用
    16.芫花酯甲對黑色素瘤轉(zhuǎn)移的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    蛋白激酶Cδ與細(xì)胞凋亡
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4049406