發(fā)布時(shí)間：2025-04-15 00:34

　　 目的探討miR-1197是否通過抑制O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)的表達(dá)影響膠質(zhì)瘤對(duì)替莫唑胺的耐藥性。方法采用qRT-PCR檢測膠質(zhì)瘤及非腫瘤腦組織中miR-1197的表達(dá)水平,CCK-8及單克隆實(shí)驗(yàn)檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡率。應(yīng)用Western blot檢測膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中MGMT及相關(guān)蛋白的表達(dá);用熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-1197與MGMT的結(jié)合。用裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-1197對(duì)膠質(zhì)瘤對(duì)替莫唑胺耐藥性的影響。結(jié)果生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫及膠質(zhì)瘤組織樣本分析顯示miR-1197在膠質(zhì)瘤中低表達(dá)。熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)顯示,miR-1197可以與MGMT的3'-UTR相結(jié)合,過表達(dá)miR-1197可抑制MGMT的表達(dá)。單克隆及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,miR-1197過表達(dá)可促進(jìn)替莫唑胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,但其可以被MGMT所逆轉(zhuǎn)。裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)表明miR-1197過表達(dá)增加膠質(zhì)瘤對(duì)替莫唑胺的敏感性。結(jié)論 miR-1197通過與MGMT的3'-UTR相結(jié)合,抑制MGMT表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)膠質(zhì)瘤對(duì)替莫唑胺的敏感性。

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【部分圖文】：

圖1 膠質(zhì)瘤組織的miR-1197表達(dá)及相關(guān)基因的分析

生物信息學(xué)軟件預(yù)測分析發(fā)現(xiàn)MGMT的3"-UTR端含有一個(gè)miR-1197的結(jié)合位點(diǎn)(圖2A)。通過熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-1197可顯著抑制野生型MGMT報(bào)告基因質(zhì)粒的熒光強(qiáng)度，而結(jié)合位點(diǎn)的突變則可阻止miR-1197對(duì)報(bào)告基因質(zhì)粒的熒光強(qiáng)度的影響(圖2B)。本研究分....

圖2 miR-1197直接靶向抑制MGMT的表達(dá)

圖1膠質(zhì)瘤組織的miR-1197表達(dá)及相關(guān)基因的分析2.3miR-1197通過MGMT影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的TMZ耐藥性

圖3 miR-1197過表達(dá)增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性

裸鼠皮下成瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-1197的實(shí)驗(yàn)組裸鼠的腫瘤明顯小于對(duì)照組(圖4A)，腫瘤細(xì)胞的生長速度顯著慢于對(duì)照組(圖4C)，且腫瘤質(zhì)量也小于對(duì)照組(圖4D)。免疫組化分析表明，實(shí)驗(yàn)組MGMT的水平顯著低于對(duì)照組(圖4B)。Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示MGMT在膠....

圖4 miR-1197過表達(dá)增強(qiáng)TMZ對(duì)皮下膠質(zhì)瘤的抑制作用

圖3miR-1197過表達(dá)增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)TMZ的敏感性3討論

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