目的探討脂蛋白特異性抗體通過血腦屏障及其在抑制金黃色葡萄球菌腦膿腫形成中的作用。方法利用大腸埃希菌表達(dá)并純化重組金葡菌脂蛋白SA2275,制備特異性小鼠多克隆抗體(anti-SA2275)。制作金葡菌感染腦膿腫模型,利用ELISA法檢測(cè)經(jīng)腹腔注射的anti-SA2275在小鼠腦組織中的滴度,評(píng)估抗體通過血腦屏障的能力;再利用梯度稀釋細(xì)菌計(jì)數(shù)法檢測(cè)腦膿腫中的細(xì)菌載量,對(duì)腦膿腫進(jìn)行連續(xù)病理切片檢測(cè)腦膿腫的大小,評(píng)價(jià)抗體anti-SA2275治療金葡菌腦膿腫的效果。結(jié)果成功獲得高純度SA2275重組蛋白;免疫小鼠獲得anti-SA2275,效價(jià)為1∶51 200;anti-SA2275注射金葡菌腦膿腫模型小鼠后,在動(dòng)物腦組織中檢測(cè)到抗體的存在;治療組小鼠腦膿腫大小和菌載量顯著低于陰性對(duì)照組。結(jié)論在金葡菌感染小鼠所致的腦膿腫形成過程中,脂蛋白SA2275特異性抗體可以通過血腦屏障分布至腦組織,顯著抑制腦膿腫的形成及細(xì)菌的定植,具有治療金葡菌腦膿腫的應(yīng)用前景。

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圖1 pET28a-sa2275表達(dá)質(zhì)粒PCR鑒定

將含sa2275基因的PCR擴(kuò)增片段與pET28a載體連接后轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,從LBKana平板上挑取轉(zhuǎn)化子,提取質(zhì)粒并進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定。結(jié)果如圖1所示,瓊脂糖凝膠電泳可見大小約800bp的目的條帶,與預(yù)期sa2275(777bp)的大小相符。進(jìn)一步質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果表明....

圖2 SA2275重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化SDS-PAGE電泳圖

培養(yǎng)工程菌pET28a-sa2275/BL21,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)3h,取樣進(jìn)行SDS-PAGE蛋白電泳分析。如圖2A所示,以未誘導(dǎo)菌作對(duì)照,在約33×103處可見目的蛋白條帶,與預(yù)期SA2275重組蛋白理論分子量相一致。收集工程菌,破碎后制備含重組蛋白上清,采用鎳柱親和層析法....

圖3 HE染色觀察金葡菌感染小鼠腦膿腫模型腦組織病理表現(xiàn)

圖2SA2275重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化SDS-PAGE電泳圖2.3金葡菌感染小鼠腦膿腫模型的建立

圖4 ELISA法檢測(cè)anti-SA2275抗體效價(jià)及金葡菌腦膿腫模型腦組織中anti-SA2275滴度計(jì)量分析

為驗(yàn)證抗體anti-SA2275對(duì)金葡菌腦膿腫形成的保護(hù)作用,本研究將小鼠anti-SA2275抗血清經(jīng)腹腔注射給藥,24h后接種金葡菌Newman株制作小鼠腦膿腫模型。5d后處死小鼠,取出腦組織。將腦膿腫組織制備勻漿,鋪板進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。結(jié)果如圖5所示,anti-SA2275....

本文編號(hào)：4056279