神經(jīng)干細(xì)胞（Neural stem cells, NSCs）是存在于胚胎期神經(jīng)系統(tǒng)和成體腦組織中的一類具有自我更新和分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞能力的干細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞不僅對胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育至關(guān)重要，也為各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷和疾病的治療帶來了希望。通過移植神經(jīng)干細(xì)胞可以在動物或人體中治療帕金森病、亨廷頓舞蹈癥、肌萎縮側(cè)索硬化癥、阿茲海默癥、多發(fā)性硬化癥、中風(fēng)和脊髓損傷等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。目前，神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增通常是在常氧即20%的氧濃度條件下進(jìn)行的，而胚胎發(fā)育和成體腦組織中的氧濃度只有3-5%，甚至更低，這種現(xiàn)象被稱作生理性低氧。近年來，越來越多的實驗證據(jù)表明低氧對于神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化具有重要的調(diào)節(jié)作用。本實驗室的研究結(jié)果表明，適度低氧能促進(jìn)成年動物腦內(nèi)和離體培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化。因此，研究低氧對神經(jīng)干細(xì)胞存活、增殖和分化的調(diào)控具有重要的意義。 低氧誘導(dǎo)因子（Hypoxia-inducible factor, HIF）作為細(xì)胞和分子水平的低氧感知分子是低氧信號通路中關(guān)鍵的調(diào)控分子之一。低氧條件下，細(xì)胞中的HIF-1α穩(wěn)定并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，通過與低氧反應(yīng)元...

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【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
    一 神經(jīng)干細(xì)胞
    二 低氧對神經(jīng)干細(xì)胞的影響
    三 低氧調(diào)控的分子機(jī)制
    四 低氧與 miRNAs
第一部分 低氧對神經(jīng)干細(xì)胞中 miR-210 的表達(dá)調(diào)控
    一、 實驗材料和試劑
        （一） 實驗動物
        （二） 主要儀器設(shè)備
        （三） 抗體
        （四） 主要試劑及常用配方
    二、 實驗方法
        （一） 原代大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和傳代
        （二） 免疫熒光
        （三） RT-PCR 檢測 mRNA 表達(dá)
        （四） Realtime-PCR 檢測 miRNA 表達(dá)
        （五） 蛋白提取和 Western blot
        （六） MiR-210-sensor 載體構(gòu)建
        （七） 細(xì)胞存活率分析
        （八） BrdU 摻入檢測細(xì)胞增殖率
        （九） TUNEL 試劑盒檢測細(xì)胞凋亡
        （十） 雙熒光素酶檢測
        （十一）數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學(xué)分析
    三、 實驗結(jié)果
        （一） 低氧對體外培養(yǎng) NSCs 中 miR-210 表達(dá)的影響
        （二） DNA 甲基化對 miR-210 表達(dá)的調(diào)控
        （三） MiR-210 對神經(jīng)干細(xì)胞存活的影響
        （四） MiR-210 對神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響
        （五） MiR-210 對神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響
        （六） MiR-210 靶基因篩選
        （七） 低氧對 HIF-1 及其靶基因 BNIP3 表達(dá)的影響
        （八） MiR-210 與 BNIP3 相互作用靶位點的預(yù)測與驗證
        （九） MiR-210 對 BNIP3 蛋白表達(dá)的影響
        （十） MiR-210 通過 BNIP3 調(diào)節(jié)低氧下 NSCs 存活
        （十一）MiR-210 抑制 AIF 入核
    四、 討論
    五、 結(jié)論
第二部分 低氧對循環(huán) miR-210 分泌的影響及其初步的功能研究
    一、 實驗材料和試劑
        （一） 主要儀器設(shè)備
        （二） 實驗動物
        （三） 主要試劑及常用配方
    二、 實驗方法
        （一） Realtime-PCR 檢測循環(huán) miRNA 的表達(dá)
        （二） 免疫熒光
        （三） 細(xì)胞存活率分析
        （四） 超速離心分離囊泡
        （五） 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學(xué)分析
    三、 實驗結(jié)果
        （一） 低氧促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分泌 miR-210
        （二） 檢測培養(yǎng)上清中含有循環(huán) miR-210 的囊泡
        （三） 循環(huán) miR-210 對 NSCs 存活的影響
        （四） 低氧對大鼠腦脊液和血液中 miR-210 含量的影響
    四 討論
    五 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ. 攻讀博士學(xué)位期間論文發(fā)表，專利申請以及獲獎情況
綜述
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝



本文編號：4049021