目的構(gòu)建用于阿尼昂尼昂熱核酸檢測(cè)的病毒樣顆粒質(zhì)控品,并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法體外合成MS2噬菌體和阿尼昂尼昂病毒相關(guān)基因,通過(guò)酶切連接的方式構(gòu)建表達(dá)載體,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并經(jīng)Co柱純化獲得病毒樣顆粒,同基質(zhì)混合后制成質(zhì)控品,采用熒光RT-PCR方法對(duì)質(zhì)控品的均勻性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、保存穩(wěn)定性和凍融穩(wěn)定性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)。結(jié)果成功構(gòu)建pET-MS2-ONNV表達(dá)載體并獲得了純化的病毒樣顆粒。制備的質(zhì)控品無(wú)質(zhì)粒DNA污染,均勻性測(cè)試時(shí)變異系數(shù)為1.25%,往返運(yùn)輸后Ct值變化不明顯,可在4、-20、-70℃條件下保存至少30 d,并可經(jīng)受8次反復(fù)凍融。結(jié)論本研究獲得了均一、穩(wěn)定、耐凍融的阿尼昂尼昂熱核酸檢測(cè)病毒樣顆粒質(zhì)控品,對(duì)阿尼昂尼昂熱的防控具有重要意義,也為其它類似傳染病病原體的質(zhì)控品構(gòu)建和評(píng)價(jià)提供了一個(gè)可行的方法。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要試劑
        1.1.2 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.2 病毒樣顆粒的表達(dá)與純化
        1.2.3 質(zhì)控品的制備
        1.2.4 質(zhì)控品的評(píng)價(jià)
            1.2.4.1均勻性
            1.2.4.2運(yùn)輸穩(wěn)定性
            1.2.4.3保存穩(wěn)定性
            1.2.4.4凍融穩(wěn)定性
2結(jié)果
    2.1病毒樣顆粒檢測(cè)結(jié)果
    2.2 質(zhì)控品的均勻性檢測(cè)結(jié)果
    2.3 質(zhì)控品的運(yùn)輸穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
    2.4 質(zhì)控品的保存穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
    2.5 質(zhì)控品的凍融穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
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