目的:探討2種磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的效果,建立一種實(shí)現(xiàn)高效穩(wěn)定磷酸鈣轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的方法。方法:熒光顯微鏡觀察采用2種磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法 (傳統(tǒng)磷酸鈣轉(zhuǎn)染法和改良磷酸鈣轉(zhuǎn)染法)轉(zhuǎn)染pCDHGFP-3xflag-TRAF6質(zhì)粒進(jìn)入293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分別檢測(cè)2種磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質(zhì)粒進(jìn)入293T細(xì)胞后,腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:熒光顯微鏡下觀察,與傳統(tǒng)磷酸鈣轉(zhuǎn)染法比較,改良磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質(zhì)粒進(jìn)入293T細(xì)胞24和48h后的轉(zhuǎn)染效率明顯升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法檢測(cè),與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法比較,磷酸鈣轉(zhuǎn)染改良法轉(zhuǎn)染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質(zhì)粒進(jìn)入293T細(xì)胞24和48h后,TRAF6mRNA和flag蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P<0.01)。結(jié)論:本研究建立的改良磷酸鈣轉(zhuǎn)染方法是一種高效、穩(wěn)定的DN...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 載體、細(xì)胞、主要試劑和儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 質(zhì)粒來(lái)源和轉(zhuǎn)染效率的計(jì)算
    1.4 傳統(tǒng)磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
    1.5 改良磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
    1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
    1.7 Real-time PCR法檢測(cè)293T細(xì)胞中腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)mRNA表達(dá)水平
    1.8 Western blotting法檢測(cè)pCDH-GFP-3xflagTRAF6質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后293T細(xì)胞中flag蛋白表達(dá)水平
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 熒光顯微鏡觀察2種轉(zhuǎn)染方法的轉(zhuǎn)染效率
    2.2 Real-time PCR法檢測(cè)pCDH-GFP-3xflagTRAF6質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后293T細(xì)胞中TRAF6 mRNA表達(dá)水平
    2.3 Western blotting法檢測(cè)pCDH-GFP-3xflagTRAF6質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后293T細(xì)胞中flag蛋白表達(dá)水平
3 討論



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