目的脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是神經(jīng)元細(xì)胞的軸突臨時(shí)或永久性的損傷,如脊髓的正常運(yùn)動(dòng)、感覺、或自主神經(jīng)功能的損傷,從而導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂。目前,大多數(shù)正在研究的治療脊髓損傷的方法都旨在減少脊髓損傷相關(guān)的癥狀以及促進(jìn)功能性神經(jīng)纖維的再生。Ras/Raf/ERK1/2信號(hào)通路是與細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、增殖和死亡相關(guān)的主要細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,越來越多的證據(jù)表明這條信號(hào)通路在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用,例如樹突和軸突的形成以及神經(jīng)元極性的形成等。因此,本研究通過建立脊髓損傷細(xì)胞模型以及小鼠脊髓損傷模型從體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩部分來驗(yàn)證Ras/Raf/ERK1/2信號(hào)通路抑制劑U0126在脊髓損傷后的修復(fù)作用及其可能的作用機(jī)制。方法體外實(shí)驗(yàn)采用NYU IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓打擊器制作C57BL/6J小鼠脊髓損傷動(dòng)物模型,在此基礎(chǔ)上建立脊髓損傷細(xì)胞模型(SCI組),術(shù)后1周選取脊髓損傷部位進(jìn)行分離培養(yǎng)脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞,對(duì)照組采用出生1天的幼鼠培養(yǎng)脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞。通過電鏡及免疫熒光方法鑒定脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞,并鑒別損傷前后細(xì)胞的差異。通過W...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、U0126抑制ERK通路修復(fù)脊髓損傷的體外研究
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和器材
        1.1.2 脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元培養(yǎng)
        1.1.3 脊髓損傷細(xì)胞模型的制備
        1.1.4 小鼠脊髓動(dòng)物模型制備
        1.1.5 神經(jīng)元細(xì)胞的免疫熒光鑒定
        1.1.6 免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）
        1.1.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        1.1.8 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        1.1.9 軸突樹突染色（DiL）
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)及鑒定
        1.2.2 免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）
        1.2.3 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        1.2.4 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        1.2.5 軸突樹突染色（DiL）
    1.3 討論
        1.3.1 脊髓損傷后興奮性和抑制性突觸之間的平衡關(guān)系
        1.3.2 細(xì)胞遷移和粘附在脊髓損傷后及修復(fù)過程中的作用
        1.3.3 樹突棘的形態(tài)和數(shù)目與脊髓損傷后神經(jīng)修復(fù)之間的關(guān)系
    1.4 小結(jié)
二、U0126抑制ERK通路修復(fù)脊髓損傷的體內(nèi)研究
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和器械
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        2.1.3 運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分（BMS評(píng)分）
        2.1.4 脊髓標(biāo)本的取材與包埋
        2.1.5 免疫組織化學(xué)染色
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分（BMS評(píng)分）
        2.2.2 免疫組織化學(xué)染色
    2.3 討論
        2.3.1 脊髓損傷動(dòng)物模型及損傷后的運(yùn)動(dòng)學(xué)評(píng)分
        2.3.2 Ras/Raf/ERK1/2 信號(hào)通路抑制后在脊髓損傷修復(fù)中的作用
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 脊髓損傷中相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4047279