低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞(Vascular endothelial cells,VECs)炎癥是動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)的重要環(huán)節(jié),但其具體調(diào)控機制尚不明確。新近研究提示,焦亡(炎性程序性細(xì)胞死亡)是剪切應(yīng)力敏感的生物學(xué)過程并貫穿As病變進程。前期研究表明DNA羥甲基化酶TET2為剪切應(yīng)力敏感基因,低剪切應(yīng)力負(fù)性調(diào)控TET2的表達,但低剪切應(yīng)力與As間的關(guān)系以及TET2在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)As中的作用及其調(diào)控機制尚不清楚。目的:探討TET2在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)HUVECs焦亡中的作用及其機制。方法:1、采用平行平板流動腔系統(tǒng),細(xì)胞水平觀察低剪切應(yīng)力和生理剪切應(yīng)力下人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)焦亡相關(guān)蛋白Caspase1、GSDMD、NLRP3、IL-1β以及TET2的表達水平;2、采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),構(gòu)建低表達TET2 HUVECs細(xì)胞株,免疫熒光和Western blotting檢測其轉(zhuǎn)染效率;3、免疫熒光檢測TET2 shRNA對細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白Caspase1的表達水平;We...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略語中英文索引
第1章 緒論
第2章 實驗材料與研究方法
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗所用細(xì)胞和試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 主要試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 慢病毒感染貼壁細(xì)胞
        2.3.3 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.3.4 ATP含量測定
        2.3.5 細(xì)胞線粒體膜電位檢測(JC-1)
        2.3.6 細(xì)胞免疫熒光
        2.3.7 透射電鏡
        2.3.8 平行平板流動腔系統(tǒng)
        2.3.9 活性氧(ROS)熒光探針-DHE檢測
        2.3.10 統(tǒng)計學(xué)方法
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 低剪切應(yīng)力上調(diào)HUVECS焦亡相關(guān)蛋白的表達
    3.2 低剪切應(yīng)力下調(diào)TET2的表達
    3.3 構(gòu)建低表達TET2細(xì)胞株
    3.4 TET2 shRNA對HUVECs形態(tài)的影響
    3.5 TET2 shRNA上調(diào)HUVECS焦亡相關(guān)蛋白Caspase1的表達
    3.6 TET2 shRNA上調(diào)HUVECs焦亡相關(guān)蛋白的表達
    3.7 TET2 shRNA對HUVECs線粒體形態(tài)的影響
    3.8 TET2 shRNA對HUVECs線粒體功能的影響
        3.8.1 TET2 shRNA抑制線粒體ATP的合成
        3.8.2 TET2 shRNA誘導(dǎo)HUVECs線粒體膜電位異常
        3.8.3 TET2 shRNA上調(diào)HUVECs線粒體ROS生成
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    References
作者攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果
基金資助
致謝



本文編號：4054081