發(fā)布時間：2020-10-21 01:33

　　 研究背景STR作為現(xiàn)今各法庭科學(xué)實驗室主要使用的重要遺傳標(biāo)記,主要原因是它具有分布廣泛以及高度的遺傳多態(tài)性的優(yōu)點�，F(xiàn)在各類別成熟的商品化試劑盒可以同時復(fù)合擴增十幾個基因座,然而對于大多數(shù)常規(guī)的STR分型試劑盒,1 ng是最為理想的初始模板量。在法醫(yī)學(xué)日常實踐中有時遇到檢材質(zhì)量不理想的情況,這些檢材使用常規(guī)試劑盒分型時經(jīng)常得到不理想甚至陰性的分型結(jié)果。不斷發(fā)展的法醫(yī)DNA分析技術(shù)日新月異,同時檢測內(nèi)容的范圍也不斷擴大,低拷貝模板生物學(xué)檢材相關(guān)分析技術(shù)受到越來越多的關(guān)注,LCN-DNA STR分型的應(yīng)用需求也相應(yīng)增加。在有限的檢材條件下,為了得到理想的STR分型圖譜,學(xué)者們提出了許多不同的方法。如增加PCR循環(huán)次數(shù)、改變PCR反應(yīng)參數(shù)、純化擴增產(chǎn)物以及全基因組擴增技術(shù)等,每種方法各有優(yōu)劣,對分型的結(jié)果也有不同程度的改善。在此之中,全基因組擴增技術(shù)是對所有的基因組序列進行非選擇性擴增,其主要目的是在避免出現(xiàn)序列傾向性的前提下使DNA的總量大幅度提高,并盡可能如實反映模板基因組的全貌,其擴增產(chǎn)物可以為隨后的擴增或測序等其他基因分析技術(shù)提供足量的模板。MALBAC是全基因組擴增技術(shù)中近年新提出的一種,它結(jié)合了MDA法與PCR方法的特點,顯示出較MDA法更高的均衡性與特異性,以及更低的等位基因丟失率。目前尚未見到MALBAC在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有關(guān)LCN-DNA STR分型方面的研究和報道,在此我們對MALBAC全基因組擴增技術(shù)對LCN-DNA STR分型結(jié)果的影響進行探索,研究包括產(chǎn)物產(chǎn)量和等位基因分型結(jié)果兩方面。目的通過比較MALBAC全基因組擴增技術(shù)在使用極低模板量擴增后產(chǎn)物的產(chǎn)量和分型結(jié)果,探究MALBAC應(yīng)用在法醫(yī)LCN-DNA STR分析中的可行性。方法(1)選擇湖北武漢5例漢族無關(guān)健康個體血樣,使用QIAamp~?DNA Blood Mini kit提取基因組DNA。(2)提取的5個樣本的基因組DNA用Quantifiler~?Trio DNA Quantification Kit定量。(3)每個定量樣本分別釋為100 pg/μL、60 pg/μL、40pg/μL、20pg/μL、10pg/μL。(4)對稀釋后樣本使用MALBAC?單細胞全基因組擴增試劑盒進行全基因組擴增。(5)使用Nanodrop 2000超微量分光光度計對純化后全基因組擴增后產(chǎn)物進行定量。(6)使用AGCU Expressmarker 22熒光檢測試劑盒對全基因組擴增產(chǎn)物進行毛細管電泳檢測分型并記錄分型數(shù)據(jù)并進行分析。結(jié)果(1)MALBAC全基因組擴增技術(shù)提高DNA模板量方面效果顯著,且產(chǎn)物終產(chǎn)量在1~6μg。(2)MALBAC全基因組擴增技術(shù)較為明顯地提高極低模板量的樣本的STR分型成功率。結(jié)論MALBAC全基因組擴增技術(shù)對于LCN-DNA STR分型在產(chǎn)物量和分型結(jié)果兩方面有顯著的提升的同時保持了較好的等位基因覆蓋率和靈敏度,為后續(xù)在法醫(yī)學(xué)LCN-DNA STR研究中的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：D919
【文章目錄】：
英文縮略詞注解
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝

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1 廖斐;MALBAC全基因組擴增技術(shù)對LCN-DNA STR分型的研究[D];華中科技大學(xué);2018年

本文編號：2849437