目的：探討乳腺癌非激素依賴型逆轉(zhuǎn)為激素依賴型的機(jī)制途徑,為臨床上治療非激素依賴性乳腺癌提供理論依據(jù)。方法：(1)將外源性SOCS3基因通過慢病毒轉(zhuǎn)染法入導(dǎo)入非激素依賴型乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,構(gòu)建SOCS3穩(wěn)轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞株,RT-PCR和免疫熒光檢測細(xì)胞中SOCS3 mRNA和蛋白表達(dá)。(2)集落形成實(shí)驗(yàn)、MTT法觀察外源性SOCS3基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞生長的影響。(3)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和Boyden Chamber法觀察SOCS3基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響。(4)Western blot法檢測SOCS3對STAT3、Akt信號分子活性的影響及細(xì)胞周期蛋白(cyclinD1、p21)的表達(dá)變化；RT-PCR和Western blot分析檢測SOCS3對MAPK、c-fos、c-jun表達(dá)的影響。(5)用他莫昔芬治療攜帶SOCS3基因的乳腺癌細(xì)胞株,并和未攜帶SOCS3基因的乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行生長速度、細(xì)胞凋亡等比較。結(jié)果：(1)構(gòu)建了穩(wěn)定的SOCS3轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型；(2)SOCS3過表達(dá)細(xì)胞生長速度比正常細(xì)胞慢,具有顯著性差異；(3)SOCS3過表達(dá)細(xì)胞的粘附、遷移...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
引言
第一章 緒論
    1.1 乳腺癌簡介
        1.1.1 乳腺癌的特征
        1.1.2 乳腺癌的治療方法
        1.1.3 乳腺癌內(nèi)分泌治療簡介
        1.1.4 乳腺癌耐藥性簡介
    1.2 他莫昔芬簡介
    1.3 SOCS家族及SOCS3簡介
    1.4 SOCS3抑制細(xì)胞因子信號的分子機(jī)制
第二章 理論分析
    2.1 乳腺癌內(nèi)分泌治療產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制分析
    2.2 SOCS3在疾病中的作用
        2.2.1 SOCS3在炎癥疾病中的作用
        2.2.2 SOCS3在肥胖病中的作用
        2.2.3 SOCS3在病毒感染性疾病中的作用
        2.2.4 SOCS3與生殖的關(guān)系
    2.3 SOCS3在惡性腫瘤中的作用
    2.4 構(gòu)建SOCS3過表達(dá)細(xì)胞株理論研究
        2.4.1 慢病毒法構(gòu)建SOCS3過表達(dá)細(xì)胞株
        2.4.2 SOCS3過表達(dá)細(xì)胞株篩選(雙重篩選)
        2.4.3 SOCS3過表達(dá)細(xì)胞株培養(yǎng)
    2.5 相關(guān)實(shí)驗(yàn)原理
        2.5.1 細(xì)胞集落(克隆)形成實(shí)驗(yàn)
        2.5.2 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.5.3 RT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.5.4 蛋白免疫印記法(western blot)
        2.5.5 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.5.6 細(xì)胞遷移(劃痕)實(shí)驗(yàn)
        2.5.7 細(xì)胞侵襲(Boyden Chamber)實(shí)驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)研究
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 樣本信息
        3.1.3 儀器設(shè)備
        3.1.4 試劑及耗材
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 SOCS3過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株的建立
        3.2.3 MTT檢測
        3.2.4 細(xì)胞克隆形成率檢測
        3.2.5 細(xì)胞粘附
        3.2.6 細(xì)胞遷移(劃痕實(shí)驗(yàn))
        3.2.7 細(xì)胞侵襲
        3.2.8 熒光定量PCR檢測相關(guān)基因mRNA水平變化
        3.2.9 免疫印跡檢測相關(guān)基因蛋白水平變化
第四章 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果
    4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    4.2 SOCS3過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株的建立
    4.3 細(xì)胞增殖的MTT檢測
    4.4 細(xì)胞克隆形成能力檢測結(jié)果
    4.5 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.6 細(xì)胞遷移(劃痕實(shí)驗(yàn))結(jié)果
    4.7 細(xì)胞侵襲結(jié)果
    4.8 熒光定量PCR檢測細(xì)胞相關(guān)基因MRNA的水平變化
    4.9 WESTERN BLOT檢測細(xì)胞相關(guān)基因蛋白水平的變化
    4.10 討論
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表的論文
附錄B 其它需要說明的內(nèi)容



本文編號：4040780