目的:膽管癌是一種起源于膽管上皮細(xì)胞的,發(fā)病率位于原發(fā)性肝癌第二位的惡性腫瘤,由于其缺乏早期診斷指標(biāo)及易早期侵襲的特點(diǎn),導(dǎo)致膽管癌死亡率高居不下。eIF3d基因是一種在翻譯起始階段起重要作用的基因,目前已經(jīng)有很多關(guān)于eIF3d基因在腫瘤中的研究,并且它被發(fā)現(xiàn)有不同程度的促癌作用,然而其在膽管癌發(fā)病過程中起到的作用尚未明確。本研究主要通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲減膽管癌細(xì)胞中eIF3d基因的表達(dá),進(jìn)而研究其對(duì)于膽管癌細(xì)胞株增殖,遷移,及細(xì)胞周期,細(xì)胞體內(nèi)成瘤情況的影響。從而探討e IF3d基因能否影響膽管癌細(xì)胞生長(zhǎng)及在細(xì)胞生長(zhǎng)中發(fā)揮的作用,推測(cè)其對(duì)膽管癌發(fā)生發(fā)展的影響。方法:1.構(gòu)建慢病毒并轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定的低表達(dá)eIF3d基因的膽管癌HCC-9810及RBE細(xì)胞系。2.進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)如,克隆形成實(shí)驗(yàn),MTT實(shí)驗(yàn),Transwell實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了體外eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞增殖遷移影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)敲減eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘?xì)胞周期的影響。通過Western-blot（過蛋白印記實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移及周期相關(guān)蛋白表達(dá)改變情況。3.設(shè)計(jì)體內(nèi)實(shí)驗(yàn),構(gòu)建裸鼠成瘤模型,探究eIF3d基因在裸鼠體內(nèi)對(duì)膽... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pLKO.1–TRC質(zhì)粒DNA圖譜

圖 2. (A)慢病毒轉(zhuǎn)染 48h 后鏡下觀測(cè)到的綠色熒光蛋白顯色情況。（B）Western-bolt 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) eIF3d 在 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）組及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒慢病毒對(duì)照組（Control）分別HCCC-9810 及 RBE 的表達(dá)情況我們通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，分別于膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）及空質(zhì)粒慢病毒（Control）,同時(shí)在慢病毒轉(zhuǎn)染后的 48 小時(shí)觀察細(xì)胞中 GFP（綠色熒光蛋白）的表達(dá)情況來推測(cè)其轉(zhuǎn)染效率（結(jié)果如圖 2 所示），兩株細(xì)胞均達(dá)到很好的轉(zhuǎn)染效率。接著通過 Western-bolt進(jìn)一步驗(yàn)證 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）的敲減效率，對(duì)敲減組細(xì)胞及其對(duì)照組進(jìn)行檢測(cè)，從而進(jìn)一步對(duì)慢病毒轉(zhuǎn)染后的實(shí)際敲減效率進(jìn)行驗(yàn)證，Western-bolt 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，eIF3d 敲減病毒組的蛋白表達(dá)水平明顯降低。通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染法獲得了較高的轉(zhuǎn)染效率，并且能夠有效的降低其在細(xì)胞中的表達(dá)量，同時(shí)獲得了穩(wěn)定低表達(dá) eIF3d 基因的膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細(xì)胞系。

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文2.2 抑制 eIF3d 基因可以顯著抑制膽管細(xì)胞體外增殖能力。由于很多研究都發(fā)現(xiàn)了eIF3d基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)作用，基于這些，我們推測(cè) eIF3d 基因很可能在膽管癌細(xì)胞增殖和運(yùn)動(dòng)侵襲中起到了一定的調(diào)控促進(jìn)功能。為了驗(yàn)證 eIF3d 對(duì)于膽管癌細(xì)胞增殖能力的影響，我們?cè)O(shè)計(jì)了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)分別從細(xì)胞群及單個(gè)細(xì)胞驗(yàn)證其對(duì)于膽管癌細(xì)胞增殖能力的影響


本文編號(hào)：2898417