細(xì)胞自噬參與抵抗?fàn)I養(yǎng)不足、疾病和衰老等過程,在此過程中一些錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)及受損的細(xì)胞器會(huì)被分解,降解后的成分得以循環(huán)利用。本研究以細(xì)胞自噬作為研究的切入點(diǎn),重點(diǎn)圍繞馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）侵染煙草能夠引起細(xì)胞自噬及過氧化物酶體自噬開展了一系列研究。為驗(yàn)證PVY侵染是否激活寄主細(xì)胞自噬,本研究以PVY、PVY-GFP-S和Nb-CFP-ATG8f轉(zhuǎn)基因植株為研究材料,以PVY侵染煙草為處理,以等量的PBS處理為對(duì)照,通過激光共聚焦顯微鏡觀察到PVY侵染煙草后有發(fā)光的自噬小體,且數(shù)量顯著高于對(duì)照,暗示PVY侵染煙草可以引起細(xì)胞自噬;為進(jìn)一步驗(yàn)證PVY侵染寄主可以引起細(xì)胞自噬,利用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞自噬分子marker ATG8蛋白表達(dá),結(jié)果表明PVY侵染煙草可以提高寄主ATG8蛋白含量;利用TEM進(jìn)一步觀察了PVY侵染對(duì)煙草細(xì)胞病理學(xué)的影響,結(jié)果顯示PVY侵染煙草可以引起胞內(nèi)過氧化物酶體中減少、葉綠體及淀粉粒的變化、自噬體在液泡降解等;為進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞自噬對(duì)PVY侵染復(fù)制的影響,利用基因沉默自噬基因ATG6和ATG7,煙草葉片的PVY-GFP熒光面...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1自噬小泡的形成(KlionskyDJ，2005)

（Autophagy-relatedgene,ATG），這些基因的編碼產(chǎn)物參與到自噬小泡形成的各個(gè)過程，包括自噬的誘導(dǎo)、小泡的成核、延伸、成熟及與液泡的融合等，這個(gè)過程中有多種自噬相關(guān)基因的參與(圖1.1)（Klionsky,2005）。在植物細(xì)胞自噬的過程中，存在種潛在....

圖2.1PVY侵染細(xì)胞自噬標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株Nb-CFP-ATG8f中ATG8-CFP的表達(dá)變化

最后用丙酮脫水。（4）在37℃條件下，包埋劑與丙酮混合液浸泡葉片1h，純包埋處理過夜，獲得樣品制（5）將樣片制品置于透射電鏡（TEM）下進(jìn)行觀察。2.2.8激光共聚焦顯微鏡觀察PVY-GFP-S侵染性克隆侵潤(rùn)轉(zhuǎn)基因煙草Nb-CFP-ATG8f48h后，取接種葉片....

圖2.2PVY侵染煙草后誘發(fā)寄主產(chǎn)生細(xì)胞自噬A:PBS處理轉(zhuǎn)基因煙草Nb-CFP-ATG8f，B-F:PVY處理轉(zhuǎn)基因煙草Nb-CFP-ATG8f

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章PVY侵染引起細(xì)理組，對(duì)照組使用等量的PBS處理，利用TEM觀察PVY-GFP-S侵染細(xì)胞噬標(biāo)記轉(zhuǎn)基Nb-CFP-ATG8f的細(xì)胞病理學(xué)特征，結(jié)果表明(圖2.2)，PVY侵染轉(zhuǎn)基因煙草Nb-CFP-ATG8f在葉片細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)雙層膜的自噬體結(jié)....

圖2.3PVY侵染對(duì)煙草ATG8含量變化分析

科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章自噬標(biāo)記蛋白ATG8的含量變化情況，結(jié)果如圖2.3所示，與PBS處理8h，煙草葉片中ATG8蛋白含量升高，3-MA與PVY侵染混合處理的葉導(dǎo)劑ConA處理和僅PVY侵染的樣品，也低于僅PBS處理的對(duì)照；CATG8的含量均高于對(duì)照和處理樣品；而單PV....

本文編號(hào)：4056856