Pseudoalteromonas sp. T1lg65中群體感應(yīng)特性及嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A對其影響的研究
發(fā)布時間:2025-06-26 05:44
群體感應(yīng)(Quorum sensing,QS)是細(xì)菌通過特殊的化學(xué)信號分子進(jìn)行社交的一種方式。信號分子依賴于細(xì)胞密度,扮演著細(xì)胞間通訊的媒介作用來調(diào)控細(xì)胞生理代謝活動。假交替單胞菌是一類新型的海洋細(xì)菌,其廣泛存在于海洋環(huán)境中,能產(chǎn)生多種活性物質(zhì)。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)假交替單胞菌活性物質(zhì)的產(chǎn)生受QS的調(diào)控,但假交替單胞菌QS系統(tǒng)及其調(diào)控機制研究尚比較缺乏。實驗室前期從西門島紅樹林海泥分離到一株具有QS能力的假交替單胞菌T1lg65,本論文旨在表征菌株T1lg65中Lux I/R型群體感應(yīng)特性,探究嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A(Stringent Starvation Protein A,SspA)對其調(diào)控作用。通過基因組注釋發(fā)現(xiàn)菌株T1lg65存在一個信號分子合成酶基因lux I和信號分子受體蛋白基因lux R。基因敲除和回補實驗發(fā)現(xiàn):Δlux I和Δlux R喪失了產(chǎn)信號分子的能力,而Δlux Ic和Δlux Rc可以恢復(fù)到野生型表型,使信號分子指示菌A136顯藍(lán)色。隨之將lux I在E.coli BL21中重組表達(dá),重組大腸桿菌也能使指示菌A136變藍(lán)。對基...
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
1.1 研究背景
1.2 研究目的
1.3 研究方案(技術(shù)路線)
1.4 預(yù)期目標(biāo)
第二章 文獻(xiàn)綜述
2.1 假交替單胞菌概述
2.1.1 假交替單胞菌簡介
2.1.2 假交替單胞菌的生態(tài)學(xué)地位及生物功能
2.2 群體感應(yīng)
2.2.1 群體感應(yīng)概述
2.2.2 群體感應(yīng)信號分子及其類型
2.2.3 QS系統(tǒng)及其類型
2.2.4 海洋細(xì)菌中的QS
2.3 Sigma因子RpoS
2.4 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A
2.4.1 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A基本概況
2.4.2 SspA研究進(jìn)展
第三章 研究內(nèi)容與實驗方法
3.1 實驗材料與設(shè)備
3.1.1 實驗藥品
3.1.2 實驗儀器與設(shè)備
3.1.3 菌種與質(zhì)粒
3.1.4 引物
3.1.5 培養(yǎng)基
3.1.6 藥品溶液的配制
3.2 基因敲除與回補
3.2.1 基因組提取
3.2.2 蔗糖敏感實驗
3.2.3 感受態(tài)的制備
3.2.4 DNA純化
3.2.5 質(zhì)粒提取
3.2.6 轉(zhuǎn)化
3.2.8 菌落PCR
3.2.9 構(gòu)建敲除載體
3.2.10 雙親接合
3.2.11 第一輪重組子篩選
3.2.12 第二輪重組子篩選
3.2.13 基因回補
3.3 異源表達(dá)信號分子合成酶
3.4 信號分子的萃取與檢測
3.4.1 信號分子的萃取
3.4.2 平行劃線法(Cross-feeding)檢測AHLs
3.4.3 報告平板法檢測AHLs
3.4.4 薄層層析法(TLC)表征AHLs
3.5 RNA的提取和熒光定量PCR
3.5.1 RNA的提取
3.5.2 熒光定量PCR
3.6 啟動子活性檢測
3.7 表型檢測
3.7.1 生長曲線的測定
第四章 結(jié)果與討論
4.1 菌株T1lg65中LuxI/R型 QS系統(tǒng)組成分析
4.1.1 luxI的功能探究
4.1.2 LuxI與 LuxR的互作關(guān)系
4.2 群體感應(yīng)信號分子的鑒定
4.2.1 生物法檢測信號分子產(chǎn)生情況
4.2.2 薄層層析法(TLC)表征信號分子種類
4.3 LuxI合成酶的保守性分析
4.4 RpoS、H-NS和 SspA影響QS系統(tǒng)
4.5 SspA對 QS調(diào)控途徑的解析
第五章 結(jié)論與展望
5.1 結(jié)論
5.2 創(chuàng)新之處
5.3 展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
1 作者簡歷
2 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集
本文編號:4053254
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
1.1 研究背景
1.2 研究目的
1.3 研究方案(技術(shù)路線)
1.4 預(yù)期目標(biāo)
第二章 文獻(xiàn)綜述
2.1 假交替單胞菌概述
2.1.1 假交替單胞菌簡介
2.1.2 假交替單胞菌的生態(tài)學(xué)地位及生物功能
2.2 群體感應(yīng)
2.2.1 群體感應(yīng)概述
2.2.2 群體感應(yīng)信號分子及其類型
2.2.3 QS系統(tǒng)及其類型
2.2.4 海洋細(xì)菌中的QS
2.3 Sigma因子RpoS
2.4 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A
2.4.1 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A基本概況
2.4.2 SspA研究進(jìn)展
第三章 研究內(nèi)容與實驗方法
3.1 實驗材料與設(shè)備
3.1.1 實驗藥品
3.1.2 實驗儀器與設(shè)備
3.1.3 菌種與質(zhì)粒
3.1.4 引物
3.1.5 培養(yǎng)基
3.1.6 藥品溶液的配制
3.2 基因敲除與回補
3.2.1 基因組提取
3.2.2 蔗糖敏感實驗
3.2.3 感受態(tài)的制備
3.2.4 DNA純化
3.2.5 質(zhì)粒提取
3.2.6 轉(zhuǎn)化
3.2.8 菌落PCR
3.2.9 構(gòu)建敲除載體
3.2.10 雙親接合
3.2.11 第一輪重組子篩選
3.2.12 第二輪重組子篩選
3.2.13 基因回補
3.3 異源表達(dá)信號分子合成酶
3.4 信號分子的萃取與檢測
3.4.1 信號分子的萃取
3.4.2 平行劃線法(Cross-feeding)檢測AHLs
3.4.3 報告平板法檢測AHLs
3.4.4 薄層層析法(TLC)表征AHLs
3.5 RNA的提取和熒光定量PCR
3.5.1 RNA的提取
3.5.2 熒光定量PCR
3.6 啟動子活性檢測
3.7 表型檢測
3.7.1 生長曲線的測定
第四章 結(jié)果與討論
4.1 菌株T1lg65中LuxI/R型 QS系統(tǒng)組成分析
4.1.1 luxI的功能探究
4.1.2 LuxI與 LuxR的互作關(guān)系
4.2 群體感應(yīng)信號分子的鑒定
4.2.1 生物法檢測信號分子產(chǎn)生情況
4.2.2 薄層層析法(TLC)表征信號分子種類
4.3 LuxI合成酶的保守性分析
4.4 RpoS、H-NS和 SspA影響QS系統(tǒng)
4.5 SspA對 QS調(diào)控途徑的解析
第五章 結(jié)論與展望
5.1 結(jié)論
5.2 創(chuàng)新之處
5.3 展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
1 作者簡歷
2 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集
本文編號:4053254
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