降低豬場(chǎng)的流行性乙型腦炎（Japanese encephalitis, JE）感染率對(duì)于阻斷人的JE暴發(fā)至關(guān)重要,鑒于我國(guó)JE防控形勢(shì)的緊迫性和現(xiàn)有基因Ⅲ型商品化乙型腦炎病毒疫苗對(duì)部分基因Ⅰ型乙型腦炎病毒（genotypeⅠJapanese encephalitis virus, GⅠJEV）流行毒株免疫保護(hù)的不確定性,急需研制安全高效、成本低廉的新型豬用GI JEV疫苗。本研究在桿狀病毒載體pFastBac^TM多克隆酶切位點(diǎn)插入GⅠJEV的prME基因表達(dá)盒,測(cè)序驗(yàn)證后的陽(yáng)性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DH10Bac^TM感受態(tài)細(xì)胞后獲得Bacmid-prME重組桿粒,進(jìn)一步將其轉(zhuǎn)染至Sf9昆蟲細(xì)胞后,獲得Bac-prME重組桿狀病毒。Western blot、間接免疫熒光及電鏡觀察GⅠJEV病毒樣顆粒組成蛋白表達(dá)及病毒樣顆粒形成情況,通過(guò)小鼠免疫試驗(yàn)初步評(píng)價(jià)GⅠJEV病毒樣顆粒的免疫原性。Sf9昆蟲細(xì)胞中prME基因表達(dá)盒編碼的蛋白得到高效表達(dá),且組裝形成病毒樣顆粒。病毒樣顆粒免疫原性評(píng)估結(jié)果表明:GⅠJEV病毒樣顆粒可誘導(dǎo)免疫小鼠產(chǎn)生高滴度的乙型腦炎病毒...

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圖3 Bac-prME 感染Sf9細(xì)胞的間接免疫熒光結(jié)果

圖2典型的細(xì)胞病變圖4prME蛋白表達(dá)的免疫印跡分析

圖4 prME蛋白表達(dá)的免疫印跡分析

圖3Bac-prME感染Sf9細(xì)胞的間接免疫熒光結(jié)果圖5JEVVLPs的電鏡圖像

圖5 JEV VLPs的電鏡圖像

圖4prME蛋白表達(dá)的免疫印跡分析2.4JEVVLPs的免疫原性評(píng)價(jià)

圖6 JEV VLPs誘導(dǎo)的抗體水平動(dòng)態(tài)曲線

噬斑減少中和試驗(yàn)(FRNT)測(cè)定免疫后第42天分離制備的各免疫組小鼠血清的JEV中和抗體效價(jià),結(jié)果顯示,本研究制備的JEVVLPs在不加免疫佐劑的情況下免疫小鼠能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)基因Ⅰ型JEV高滴度的中和抗體(圖7a),VLP200免疫組的平均中和抗體效價(jià)為1∶160,....

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