目的:探討力學因素-流體切應力(fluid shear stress,FSS)和化學因素-血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)對人內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中PIM激酶家族表達的影響及可能的信號機制。方法:(1)人臍血EPCs的分離、培養(yǎng)與鑒定:采用密度梯度離心聯(lián)合差速貼壁法分離、培養(yǎng)人臍血EPCs;吞噬乙�；�低密度脂蛋白(Dil-acetylated LDL,DilacLDL)與結(jié)合FITC標記的荊豆凝集素I(FITC-labeled europaeus agglutinin-I,FITCUEA-I)能力的實驗進行細胞學鑒定。(2)VEGF對PIM激酶家族表達的檢測:采用實時定量PCR技術檢測VEGF刺激0.5 h、1 h、2 h、4 h及6 h時PIM激酶的表達水平。(3)切應力對PIM激酶家族表達的檢測:利用平行平板流動腔系統(tǒng)對EPCs加載低(5 dyne/cm2)、中(15 dyne/cm2)及高(30 dyne/cm2)不同強度切應力,作用不同時間后(1 h、2 ...

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【學位級別】：碩士

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縮略詞
引言
第一部分 人臍血EPCs的培養(yǎng)及PIM在EPCs中表達的檢測
    1.材料與方法
        1.1 實驗細胞來源
        1.2 主要試劑及溶液的配制
        1.3 實驗儀器
        1.4 人臍血EPCs的分離與培養(yǎng)
        1.5 Dil-acLDL、FITC-UEA-I免疫組化
        1.6 總RNA的提取及半定量PCR
    2.結(jié)果
        2.1 人臍血來源EPCs的鑒定
        2.2 EPCs中PIM激酶家族的表達
    3.討論
第二部分 體外EPCs切應力加載模型的建立
    1.材料與方法
        1.1 EPCs細胞爬片的制備
        1.2 平行平板流動腔系統(tǒng)的建立
    2.結(jié)果
    3.討論
第三部分VEGF對EPCs中PIM激酶表達的影響
    1.材料與方法
        1.1 主要試劑及溶液的配制
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗分組
        1.4 VEGF作用于EPCs
        1.5 抑制劑的處理
        1.6 實時定量PCR
        1.7 統(tǒng)計學分析
    2.結(jié)果
    3.討論
第四部分 切應力對EPCs中PIM激酶家族及相關信號通路的影響
    1.材料與方法
        1.1 主要試劑及溶液的配制
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗分組
        1.4 抑制劑的處理
        1.5 實時定量PCR
        1.6 蛋白質(zhì)免疫印及實驗
        1.7 統(tǒng)計學分析
    2.結(jié)果
        2.1 不同切應力下對PIM激酶家族基因表達的影響
        2.2 切應力誘導PIM激酶表達上調(diào)相關的信號通路
        2.3 不同時間點下，5 dyne/cm2切應力對EPCs相關信號分子的影響
    3.討論
結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
附錄



本文編號：4051041