PP2C是一大類(lèi)重要的蛋白磷酸酶,廣泛參與不同的逆境脅迫響應(yīng)。為了解PP2C基因在干旱響應(yīng)中的功能,以亞洲棉石系亞1號(hào)為材料,利用RT-PCR方法從中克隆了GaPP2C24基因,并對(duì)該基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,熒光定量PCR研究了其在亞洲棉不同組織和干旱脅迫下的表達(dá)情況。結(jié)果表明,GaPP2C24基因CDS序列全長(zhǎng)為1 251 bp,編碼416個(gè)氨基酸。序列同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),GaPP2C24與其他植物的PP2C氨基酸序列有較高的相似性,其中與可可樹(shù)(EOY33930.1)、黃麻(OMO91132.1)的相似性分別為85%,84%。進(jìn)化分析表明,GaPP2C24與同屬錦葵目的黃麻聚在一支,親緣關(guān)系最近,與可可樹(shù)的親緣關(guān)系次之。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明,GaPP2C24基因在子葉、下胚軸、胚根、葉、莖和根均有表達(dá),且在莖中的表達(dá)量最高,根中次之。GaPP2C24受干旱脅迫的誘導(dǎo)表達(dá),其在根和葉片中的相對(duì)表達(dá)量在處理1 h后最高,分別達(dá)到對(duì)照的53.9,6.9倍,推測(cè)該基因在棉花干旱響應(yīng)中有重要作用。

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圖1 GaPP2C24基因的克隆

根據(jù)本研究室石系亞1號(hào)干旱轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的差異表達(dá)基因Cotton_A₁2895設(shè)計(jì)PCR特異引物,以石系亞1號(hào)葉片cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,回收目的條帶（圖1）,克隆到pEASY-T3載體上,進(jìn)行測(cè)序分析,測(cè)序結(jié)果與NCBI上公布的....

圖2 GaPP2C24蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)

SOPM蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明,編碼該蛋白的139個(gè)氨基酸可能形成α螺旋(33.41%),107個(gè)氨基酸可能形成延伸帶(25.72%),43個(gè)氨基酸可能形成β轉(zhuǎn)角(10.34%),127個(gè)氨基酸可能形成無(wú)規(guī)則卷曲(30.53%)(圖2)。利用SWISS-MODEL工具進(jìn)行三維結(jié)....

圖3 預(yù)測(cè)的GaPP2C24蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)

圖2GaPP2C24蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)2.3GaPP2C24蛋白同源性和系統(tǒng)進(jìn)化分析

圖4 GaPP2C24與不同植物的PP2C氨基酸序列多重比對(duì)

將GaPP2C24氨基酸序列提交到NCBI進(jìn)行BlastP比對(duì),結(jié)果表明,GaPP2C24與可可樹(shù)（EOY33930.1）、黃麻（OMO91132.1）的PP2C蛋白的相似性較高,分別為85%和84%,與擬南芥（NP₁72223.1）的相似性為56%。選取可....

本文編號(hào)：4051059