牡丹(Paeonia Sect.Moutan)遺傳背景復(fù)雜,通過雜交育種培育一個新品種至少需要10余年時間,包括轉(zhuǎn)基因育種在內(nèi)的分子育種將成為牡丹遺傳改良的主要發(fā)展方向。然而,牡丹組織離體再生困難,至今尚未建立成熟的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系。因此,探索一種簡單、快速、有效的遺傳轉(zhuǎn)化新方法對牡丹育種具有重要意義。本研究采用四氧化三鐵納米磁珠轉(zhuǎn)化方法,首次進行了花粉介導(dǎo)牡丹轉(zhuǎn)基因的研究,選用磁性納米顆粒(Magnetic nanoparticles,MNPs)poly MAG100為基因載體,構(gòu)建不同質(zhì)量比的納米載體-基因復(fù)合物;通過瓊脂糖凝膠電泳阻滯試驗分析poly MAG100與DNA的結(jié)合能力以及保護DNA免受消化酶降解的能力;利用MNPs吸附質(zhì)粒DNA,在磁場的作用下,將FT-EPSPS目的基因?qū)牖ǚ?通過離體培養(yǎng)研究磁轉(zhuǎn)染處理對花粉活力的影響;研究牡丹三個雜交組合FI代植株對草甘膦鹽溶液的敏感性,及對潮霉素溶液的抗性,探究得出適宜牡丹的篩選體系;對初步篩選出的抗性種苗進行外源基因分子檢測,分析其在牡丹基因組中的整合情況。所得結(jié)論如下:1 poly MAG100與DNA的質(zhì)量比為1:1-1...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1草甘膦的作用機理

5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)在磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和莽草酸-3-磷酸(S3P)反應(yīng)合成5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸(EPSP)的過程中起到催化劑的作用,而草甘膦的空間結(jié)構(gòu)與磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)較為相似,并且兩者與5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3....

圖1-2研究技術(shù)路線

綜上所述,本研究的技術(shù)路線可以總結(jié)為圖1-2。2.1試驗材料

圖2-1 PCAMBIA 1301圖譜

引物由TaKaRa公司合成。2.2試驗方法

圖2-2 pCAMBIA1301-FT菌液PCR

挑選出陽性單菌落擴搖后,進行菌液PCR擴增反應(yīng),擴增長度約為970bp,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析,結(jié)果表明:條帶與預(yù)期大小相符(圖2-2),初步表明該克隆即為陽性克隆。2.3.2pCAMBIA1301-FT產(chǎn)物的鑒定

本文編號：4055182