將Cpf1核酸酶N端166個氨基酸的DNA編碼序列克隆至pET-28a(+)質(zhì)粒中,在大腸桿菌BL21中進行重組表達,對誘導其表達的IPTG濃度和誘導時間開展條件優(yōu)化。利用6×His純化標簽得到的重組蛋白作為抗原進行動物免疫,間接ELISA方法測定免疫后抗血清效價達到128 000,并經(jīng)Protein A純化后得到抗體,Western Blot分析抗體的特異性,結果顯示可以特異性識別大腸桿菌中表達的Cpf1~((1-166))和Cpf1,為Cpf1在生物體中的檢測提供工具,且將為推動CRISPR/Cpf1系統(tǒng)在生物體中的應用奠定良好的實驗基礎。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、質(zhì)粒和動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 實驗動物
    1.2 方法
        1.2.1 原核表達載體的構建
        1.2.2 Cpf1(1-166)在大腸桿菌細胞內(nèi)的條件改良
        1.2.3 融合蛋白6×His-Cpf1(1-166)的純化
        1.2.4 多克隆抗體的制備
        1.2.5 ELISA法測定效價
        1.2.6 抗血清的純化
        1.2.7 SDS-PAGE和Western Blot分析
2 結果與分析
    2.1 原核表達載體的構建及鑒定
    2.2 Cpf1(1-166)在大腸桿菌細胞內(nèi)表達的條件改良
    2.3 重組蛋白的純化及Western Blot分析
    2.4 ELISA測定抗血清效價
    2.5 多克隆抗體的特異性檢測
3 討論與結論



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