恩拉霉素作為一種新型商業(yè)抗菌劑,由于其具有熱穩(wěn)定、不易產(chǎn)生交叉耐藥性、低殘留、對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽性菌的強(qiáng)大殺菌作用以及促進(jìn)動(dòng)物生長等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于國內(nèi)外的畜禽養(yǎng)殖業(yè)中。目前恩拉霉素主要由殺真菌素鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus）進(jìn)行液體有氧發(fā)酵生產(chǎn),然而仍存在恩拉霉素菌株生產(chǎn)水平低、發(fā)酵成本高、恩拉霉素生物合成途徑和代謝調(diào)節(jié)機(jī)制了解不充分等問題。因此,本論文首次以重離子束輻照作為微生物誘變手段獲得大量S.fungicidicus突變體,通過多重篩選得到恩拉霉素高產(chǎn)菌株,并進(jìn)一步對(duì)發(fā)酵工藝優(yōu)化和發(fā)酵過程調(diào)控方面進(jìn)行了研究。此外,利用基因組學(xué)手段分析了突變菌株的變異位點(diǎn)及相關(guān)高產(chǎn)機(jī)制。具體研究結(jié)果如下:（1）選擇能量為80MeV/u,LET為40keV/μm的重離子束對(duì)恩拉霉素產(chǎn)生菌SG-01進(jìn)行不同劑量的輻照處理。通過平板計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)菌株的致死率,確定菌株致死率與輻照劑量兩者之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。利用瓊脂塊篩選和搖瓶篩選得到了三株高產(chǎn)恩拉霉素菌株M13、M30和M34,并且三株突變菌株連續(xù)5代產(chǎn)恩拉霉素能力比較穩(wěn)定。M13、M30和M34具有顯著增強(qiáng)的恩拉霉...

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1恩拉霉素分子結(jié)構(gòu)圖式

20世紀(jì)60年代,日本武田藥品工業(yè)株式會(huì)社的研究人員對(duì)兵庫縣西宮市的土壤微生物進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)一株殺真菌素鏈霉菌StreptomycesfungicidicusNO.B5477。恩拉霉素是從該菌株的發(fā)酵液和菌絲體中分離提取得到的一種環(huán)狀多肽類抗生素,又可稱為安來霉素、恩霉素、持....

圖1.2恩拉霉素的作用機(jī)制

由于化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有氯元素,恩拉霉素還屬于一種天然鹵化物,與目前發(fā)現(xiàn)的含鹵素抗生素例如萬古霉素、氯霉素等一樣都具有強(qiáng)大的生物活性,它能夠在需氧和厭氧條件下抑制和殺死大部分革蘭氏陽性菌如鏈球菌、金黃色葡萄球菌、梭狀芽孢桿菌、肺炎雙球菌等,抑菌濃度(Minimuminhibitory....

圖5.1添加維生素C后恩拉霉素含量的變化趨勢(shì)。**p<0.01,*p<0.05 vs Control

為了進(jìn)一步考察維生素C對(duì)M30生長和恩拉霉素合成的影響,對(duì)發(fā)酵過程中不同時(shí)間點(diǎn)的發(fā)酵參數(shù)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如圖5.1所示。與對(duì)照組相比,通過第4天補(bǔ)加維生素C,實(shí)驗(yàn)組后期恩拉霉素合成速率加快,在發(fā)酵至第10天時(shí)達(dá)到了1.03g/L。因此,確定維生素C的最適添加時(shí)間和濃度分別為發(fā)酵第....

圖5.2維生素C對(duì)抗氧化關(guān)鍵酶和總抗氧化能力的影響。(A)M30蛋白濃度;(B)SOD;(C)CAT;(D)T-AOC。**p<0.01,*p<0.05 vs Control

細(xì)胞在氧化應(yīng)激條件下響應(yīng)的抗氧化保護(hù)機(jī)制主要分別兩種,一種是抗氧化劑直接清除活性氧,另一種方式比較復(fù)雜,是間接通過中介來影響抗氧化酶的表達(dá)(Dinkova-Kostova和Talalay,2008;Halliwell等.,2007)。為了進(jìn)一步探索維生素C對(duì)M30生長和恩拉霉素合....

本文編號(hào)：4055298