目的 OLN-93細胞是實驗室常用的少突膠質(zhì)前體細胞細胞系,多被用于研究少突膠質(zhì)細胞的分化。本文來探討OLN-93細胞系的最佳分化條件。方法分別用DMEM、DMEM+三碘甲狀腺原氨酸(T3)、DMEM+T3+N2、DMEM/F12、DMEM/F12+T3、DMEM/F12+T3+N2等6種不同培養(yǎng)基條件對OLN-93細胞系進行分化處理,于處理后的第3d和第6d觀察細胞形態(tài)變化并通過免疫熒光技術(shù)鑒定細胞分化情況,同時通過檢測髓鞘主要標志物MBP、CNP基因的mRNA和蛋白質(zhì)的表達情況來分析細胞的分化狀態(tài),從而篩選出OLN-93細胞的最優(yōu)分化培養(yǎng)基。結(jié)果比較OLN-93細胞在6種不同條件下的分化情況,免疫熒光、qPCR和Western Blot檢測顯示出基本一致的結(jié)果,DMEM培養(yǎng)基中的細胞分化狀態(tài)最好,其次為DMEM+T3組,而DMEM+T3+N2和DMEM/F12+T3+N2組最差。結(jié)論 DMEM培養(yǎng)基為適宜OLN-93細胞生長分化的最佳培養(yǎng)條件,其他成分如F12、N2均會不同程度的抑制細胞的分化。我們實驗發(fā)現(xiàn)OLN-93已經(jīng)喪失了對T3的反應,這一點在使用OLN-93細胞的實驗研究中...

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【部分圖文】：

圖1 不同分化條件對OLN-93細胞內(nèi)CNP表達影響的免疫熒光檢測（DAPI復染細胞核）。

我們對OLN-93細胞在各種不同分化條件下進行分化處理,第3d進行CNP+細胞占總細胞比例的檢測,第6d進行MBP+細胞比例的檢測,結(jié)果顯示:與其他5組相比,DMEM培養(yǎng)基中CNP和MBP陽性細胞比例最高(CNP+細胞98.29±0.37%,MBP+細胞97.43±1.22%)....

圖2 不同分化條件對OLN-93細胞內(nèi)MBP表達影響的免疫熒光檢測（DAPI復染細胞核）。

繼而通過Westernblot檢測第3d和第6d不同的分化條件下OLN-93細胞髓鞘相關蛋白的表達水平,發(fā)現(xiàn)在DMEM培養(yǎng)基中CNP和MBP表達水平最高(圖2)。對照蛋白和mRNA檢測的結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)CNP和MBP表達水平的相對高低與mRNA表達不一致,但在其他條件相同的情況下....

圖4.在分化培養(yǎng)液中培養(yǎng)3d(A）、6d(B),OLN-93細胞的髓鞘相關蛋白Western blot檢測結(jié)果。

圖2不同分化條件對OLN-93細胞內(nèi)MBP表達影響的免疫熒光檢測（DAPI復染細胞核）。討論

本文編號：4056243