抗壞血酸(Ascorbic acid,AsA),又稱(chēng)維生素C(VC),存在于大多數(shù)植物綠色組織中,是植物體重要的氧化還原劑,在非生物脅迫和生物脅迫響應(yīng)下均對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育起著重要作用。本課題組前期研究表明過(guò)量表達(dá)AtOxR基因與ROS的清除和AsA含量的變化存在一定的相關(guān)性,但該基因與植物非生物脅迫應(yīng)答的分子作用機(jī)制尚不明確。因此,在蛋白水平深入探討該基因?qū)χ参矬w內(nèi)AsA水平的影響,為植物應(yīng)對(duì)非生物脅迫研究提供科學(xué)理論依據(jù)。本研究探討了 AtOxR與光形態(tài)建成因子COP9復(fù)合體AtCSN5B亞基的相互作用以及對(duì)植物體內(nèi)AsA水平的影響。研究結(jié)果表明:植物體內(nèi)的AsA含量在光照條件下增加,而在黑暗條件下降低。AtOxR基因在光照條件下被強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá),在黑暗條件下被抑制表達(dá)。相反,AtCSN5B基因受光照條件抑制表達(dá),在黑暗條件下被誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)酵母雙雜交、雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)和體外Pull-down實(shí)驗(yàn)研究表明AtOxR與AtCSN5B之間存在相互作用。進(jìn)一步分析AtOxR基因過(guò)量表達(dá)AtOxR-OE、AtOxR基因突變體atoxr、AtCSN5B基因突變體atcsn5b及野生型擬南...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
1 緒論
    1.1 課題背景
    1.2 活性氧
        1.2.1 植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生
        1.2.2 植物體損傷產(chǎn)生活性氧的清除機(jī)制
    1.3 抗壞血酸的研究進(jìn)展
        1.3.1 抗壞血酸的合成與代謝
        1.3.2 光對(duì)植物抗壞血酸含量的影響
    1.4 AtOxR基因研究進(jìn)展
    1.5 COP9信號(hào)復(fù)合體
        1.5.1 COP9信號(hào)復(fù)合體的功能
        1.5.2 CSN5的結(jié)構(gòu)與功能
    1.6 本研究目的與意義
2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 質(zhì)粒、菌株與載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 培養(yǎng)基配置
        2.2.2 光周期測(cè)定野生型擬南芥AsA含量材料準(zhǔn)備
        2.2.3 植物總RNA提取
        2.2.4 熒光定量PCR
        2.2.5 載體構(gòu)建
        2.2.6 農(nóng)桿菌滲透法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥
        2.2.7 酵母共轉(zhuǎn)化
        2.2.8 體外Pull-down實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 植物總蛋白提取
        2.2.10 蛋白含量測(cè)定
        2.2.11 Western Blot測(cè)定
        2.2.12 基因槍轟擊法
        2.2.13 抗壞血酸含量測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 擬南芥AtOxR及AtCSN5B基因與光周期相關(guān)性的研究
        3.1.1 光周期對(duì)野生型擬南芥AsA含量的影響
        3.1.2 擬南芥AtOxR、AtCSN5B基因與光周期應(yīng)答分析
        3.1.3 小結(jié)
    3.2 擬南芥AtOxR與AtCSN5B蛋白相互作用驗(yàn)證分析
        3.2.1 AtOxR與AtCSN5B共轉(zhuǎn)化酵母驗(yàn)證
        3.2.2 BiFC驗(yàn)證蛋白之間的相互作用
        3.2.3 體外Pull-down驗(yàn)證蛋白之間的相互作用
        3.2.4 小結(jié)
    3.3 AtOxR基因?qū)M南芥AsA含量的影響
        3.3.1 擬南芥AtOxR基因突變體鑒定
        3.3.2 擬南芥AtOxR基因與AtCSN5B基因?qū)₂O₂脅迫的應(yīng)答分析
        3.3.3 擬南芥AtOxR基因與AtCSN5B基因?qū)aCl脅迫的應(yīng)答分析
        3.3.4 AtOxR基因?qū)庹{(diào)控下植物體內(nèi)AsA含量的影響
        3.3.5 小結(jié)
4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：4056071