月季黑斑病是月季露地栽培的第一大病害。是世界性的病害,發(fā)生普遍且嚴重,較難防治,其病原菌為薔薇盤二孢(Marssoninarosae)。伴隨著月季定向選育工作的開展,其病原菌易產(chǎn)生各類生理小種,導致月季的抗病性逐漸變?nèi)?目前,噴施化學藥劑的方法可以用來預防和抑制病原菌的產(chǎn)生,但化學藥劑的大量使用不僅增加了生產(chǎn)成本,還會導致生態(tài)環(huán)境的惡化。分子生物學的深入發(fā)展,使得從植物本身去尋找抗逆性變?yōu)榭赡�。木香花為�?yōu)質(zhì)的野生資源,是高抗黑斑病種。本研究以木香花為研究對象,采用TA克隆法和RACE技術(shù),獲得抗黑斑病基因RbRdr1全長序列,并對其進行生物信息學分析;采用實時熒光定量PCR法對該基因在木香花的不同組織部位,以及木香花成熟葉片受黑斑病菌侵染不同時期的時空表達進行分析。主要研究結(jié)果如下:1.克隆獲得1個全長基因,為3462bp。其包含了 1個33bp的5'-UTR,1個3396bp的ORF,1 個33bp的3'-UTR,將其命名為RbRdr1 GenBank注冊號MK584935。2.該基因的亞細胞定位于線粒體及過氧化物酶體,不具有信號肽及跨膜結(jié)構(gòu)域,a-螺旋及無規(guī)卷曲為主要二級結(jié)構(gòu)。氨基酸...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮列詞表
第一章 研究背景
    1 月季簡介
    2 月季黑斑病概述
        2.1 發(fā)病癥狀及危害
        2.2 黑斑病菌的分類
        2.3 黑斑病菌的形態(tài)
        2.4 發(fā)病原因及發(fā)病規(guī)律
            2.4.1 發(fā)病原因
            2.4.2 發(fā)病規(guī)律
        2.5 月季黑斑病的致病概述
    3 月季品種的抗性
        3.1 月季抗黑斑病的超微結(jié)構(gòu)
        3.2 黑斑病的生理生化機制
        3.3 抗性遺傳
    4 月季抗黑斑病的分子水平研究
        4.1 抗黑斑病基因Rdr1的概述
        4.2 月季遺傳圖譜構(gòu)建
    5 本研究的目的意義及技術(shù)路線
        5.1 目的及意義
        5.2 技術(shù)路線
第二章 木香花抗黑斑病基因RbRdr1全長克隆
    1 實驗材料
        1.1 植物材料
        1.2 主要儀器與試劑
        1.3 培養(yǎng)基
        1.4 引物序列
    2 實驗方法
        2.1 木香花總RNA的提取
        2.2 總RNA完整性、濃度及純度檢測
        2.3 cDNA第一條鏈的合成
        2.4 目的片段PCR克隆
        2.5 目的片段瓊脂糖凝膠回收及純化
        2.6 連接與轉(zhuǎn)化
    3 結(jié)果與分析
        3.1 總RNA的提取
        3.2 木香花抗黑斑病基因cDNA全長的獲得
第三章 木香花RbRdr1基因序列的生物信息學分析
    1 材料與方法
        1.1 數(shù)據(jù)來源
        1.2 RbRdr1蛋白的結(jié)構(gòu)特征分析
        1.3 系統(tǒng)進行分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RbRdr1蛋白的理化性質(zhì)
        2.2 RbRdr1蛋白的信號肽、亞細胞定位及跨膜分析
        2.3 RbRdr1蛋白的二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預測
        2.4 系統(tǒng)進化分析
    3 討論
第四章 木香花RbRdr1基因的時空表達分析
    1 實驗材料
        1.1 植物材料
        1.2 引物序列
        1.3 主要儀器與試劑
    2 實驗方法
        2.1 木香花成熟葉電鏡掃描
        2.2 總RNA的提取
        2.3 cDNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.4 RbRdr1基因qRT-PCR表達分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 木香花成熟葉掃描分析
        3.2 引物特異性擴增分析
        3.3 RbRdr1在木香花不同組織部位的表達分析
        3.4 抗黑斑病候選基因RbRdr1的qRT-PCR表達分析
    4 討論
第五章 結(jié)論及后續(xù)工作建議
    1 主要研究結(jié)果
    2 后續(xù)工作建議
參考文獻
附圖
攻讀碩士學位期間完成的科研成果及獲獎情況
致謝



本文編號：4056300